GB 4789.49-2024食品微生物学检验产志贺毒素大肠埃希氏菌检验.docxVIP

中华人民共和国国家标准

GB4789.49—2024

食品安全国家标准

食品微生物学检验

产志贺毒素大肠埃希氏菌检验

2024-02-08发布2024-08-08实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局

发布

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GB4789.49—2024

食品安全国家标准

食品微生物学检验

产志贺毒素大肠埃希氏菌检验

1范围

本标准规定了食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shigatoxin-producingEscherichiacoli,STEC)的检验方法。

本标准适用于食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。

2.1恒温培养箱:36℃±1℃、44℃±1℃。

2.2冰箱:2℃~5℃、-18℃~-20℃。

2.3天平:感量为0.001g。

2.4均质器。

2.5旋涡振荡器。

2.6恒温水浴箱50℃~55℃、恒温金属浴99℃±1℃。

2.7离心机:最大转速至少16000g。

2.8实时荧光定量PCR仪。

2.9混匀仪。

2.10无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。

2.11电动移液枪或吸耳球。

2.12无菌具塞锥形瓶:容量250mL、500mL、1000mL。

2.13无菌培养皿:直径90mm。

2.14无菌均质袋:带滤网,无菌均质杯。

2.15平盖八联排管或96孔PCR微孔板。

2.16磁珠分离富集装置。

2.17微量移液器及吸头:0.2μL~2μL、2μL~20μL、20μL~200μL、100μL~1000μL。

2.1810μL无菌接种环。

2.191.5mL无菌EP管,无菌微量离心管,无菌15mL离心管。

2.200.22μm孔径无菌过滤膜。

2.21全自动微生物生化鉴定系统。

2.22基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)。

3培养基和试剂

3.1改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mTSB):见A.1。

3.2EC肉汤培养基(EC):见A.2。

3.3胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA):见A.3。

3.4STEC显色培养基:见A.4。

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GB4789.49—2024

3.5麦康凯琼脂培养基(MAC):见A.5。

3.6脑心浸出液肉汤(BHI)-50%甘油:见A.6。

3.70.85%灭菌生理盐水。

3.85%Chelex-100溶液:见A.7。

3.9E-buffer溶液:见A.8。

3.101mol/L盐酸溶液。

3.111×TE缓冲液:见A.9。

3.12无菌PBS缓冲液:见A.10。

3.13实时荧光定量PCR反应体系配制用试剂(10×buffer、dNTPs、Taq酶和ddH2O)。

3.14STEC免疫磁珠分离相关试剂或等效试剂盒。

3.15生化鉴定试剂盒或生化鉴定相关试剂。

3.16具有菌种保藏资质单位提供的志贺毒素基因(Shigatoxingene,stx)阳性大肠埃希氏菌标准菌株,即携带stx1和/或stx2,如O157:H7[CMCC(B)44939,GDMCC1.2702或等效菌株]和stx阴性大肠埃希氏菌标准菌株,即不携带stx1和stx2,如CMCC(B)44102,GDMCC1.223或等效菌株。免疫磁珠富集处理的标准菌株:血清型O26型大肠埃希氏菌标准菌株,如CMCC(B)43221、GDMCC1.3807或等效菌株;血清型O45,CMCC(B)43242,GDMCC1.3808或等效菌株;血清型O103,CMCC(B)43234,GDMCC1.3809或等效菌株;血清型O111,CMCC(B)43211,GDMCC1.3810或等效菌株;血清型O121,CMCC(B)4322