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菊花的组织培养实验报告单

班级：____________实验日期：______________

指导教师：___________学生姓名：_____________小组成员有：_____________

实验原理

1.植物细胞表现出全能性需要经历脱分化和再分化过程。

2.细胞分裂素和生长素是启动细胞分裂、影响脱分化和再分化的关键激素，激素浓度和比例会影响植物细胞发育的方向。

目的要求

1.了解植物组织培养的基本原理。

2.了解生长素和细胞分裂素的浓度、用量的比例对菊花愈伤组织形成和分化的影响。

3.尝试进行植物组织培养。

材料用具

1.材料：幼嫩的菊花茎段、培养基、体积分数为70%的酒精、质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液和无菌水等。各种培养基的配制参见本书附录1。

2.用具：50mL锥形瓶（或植物组织培养瓶）、烧杯、酒精灯、超净工作台（或接种箱）、高压蒸汽灭菌锅、培养箱、封口膜、滤纸、标签、消毒用酒精棉球、培养皿、解剖刀和镊子等。

方法步骤

1.外植体消毒

酒精擦拭双手和超净工作台台面。将流水充分冲洗后的外植体用酒精消毒30s，然后立即用无菌水清洗2~3次；再用次氯酸钠溶液处理30min后，立即用无菌水清洗2~3次。

2.外植体的接种

将消过毒的外植体置于无菌的培养皿中，用无菌滤纸吸去表面水分。用解剖刀将外植体切成0.5~1cm长的小段。在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3~1/2插入诱导愈伤组织的培养基中。用封口膜或瓶盖封盖瓶口，并做好标记。

3.愈伤组织培养

将接种外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18～22℃的培养箱中培养。培养过程中，定期观察和记录愈伤组织的生长情况。

4．生芽、生根培养

培养15～20d后，将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上。长出芽后，再将其转移到诱导生根的培养基上，进一步诱导形成试管苗。

5．炼苗、移栽

移栽前先打开封口膜或瓶盖，让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长大后再移栽入土。每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。

结果分析与评价

1.接种3-4d后，检查外植体的生长情况，统计有多少外植体被污染，有多少能正常生长，并分析它们被污染的原因。

2.你培养出来愈伤组织了吗？如果培养出来了，从刚接种的外植体到长出愈伤组织经历了多少天？这些愈伤组织进一步分化出芽和根了吗？