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柠条单宁提取纯化丙酮法

1范围

本文件规定了柠条单宁提取纯化的材料与试剂、仪器与设备、单宁提取、单宁纯化和注意事项。

本文件适用于柠条中单宁的丙酮法提取。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27985饲料中单宁的测定分光光度法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

单宁tannin

植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的具有多元酚结构的次生代谢物，分子量在500～3000Da。

4材料与试剂

材料

全株柠条，经切段，粉碎，过孔径0.425mm筛，置于避光处，备用。

试剂

4.2.1试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水的要求。

4.2.2根据用量分别配制50%、70%丙酮水溶液。

4.2.3根据用量配制80%乙醇水溶液。

4.2.4葡聚糖凝胶SephadexLH-20（溶胀度≥2.5mL/g）。

5仪器与设备

旋转蒸发仪（转速范围20rpm～280rpm，温度范围室温±5℃～180℃）。

真空冷冻干燥机（冷阱温度能达到-80℃）。

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搅拌器（转速范围0rpm～1000rpm）。

电子天平（精度为0.01g，0.0001g）。

高速冷冻离心机（转速范围0rpm～12000rpm，温度≤4℃）。

水浴锅（温度范围室温±5℃～100℃）。

粉碎机（筛底孔径0.425mm）。

可调移液器（0.5mL～5mL，1mL～10mL）。

真空泵（极限真空度-0.098MPa）。

布氏漏斗（500mL，直径200mm，带磨口三角瓶，且带真空泵接口）。

聚乙烯离心管（5mL、50mL）。

6单宁提取

称取200g柠条样品置于2L70%丙酮溶液中，置于搅拌器上搅拌抽提2h后，将抽提物于室温下

以3500rpm/min离心10min，取上清液。重复上述步骤提取一次，将两次提取液混合。经旋转蒸发仪

（70rpm，50℃）减压蒸发浓缩。置于真空冷冻干燥机冻干，冻干粉即为柠条单宁的粗提物，提取率

约为5%。置于棕色瓶中，在-20℃下保存。

7单宁纯化

凝胶活化

称取200g葡聚糖凝胶SephadexLH-20干粉置于可密封容器中，加入800mL80%乙醇，密封后，

于4℃条件下静置8小时以上，倒掉乙醇，再适量加入80%乙醇浸泡，平衡1h～2h后，转移到布氏

漏斗中，待用。

凝胶过滤

7.2.1取6中所得单宁粗提物冻干粉，加入适量80%乙醇搅拌，直至完全溶解，用定性滤纸过滤。

7.2.2将滤过液转移到装有活化凝胶的布氏漏斗中（为层析柱），真空缓慢抽滤。待全部溶液滤完，

用80%乙醇反复冲洗凝胶层析柱子除去杂质，待到滤液颜色逐渐变浅到无色，弃去所有滤液。

7.2.3再用50%丙酮水溶液进行洗脱，反复操作直到滤液颜色为无色，合并所有的滤液，将滤液经旋

转蒸发仪（70rpm，50℃）浓缩，置真空冷冻干燥机冻干（冷阱温度-45℃，系统压强8Pa），冻干

粉即为柠条单宁的纯品，置棕色瓶中，于-20℃下保存。

纯度测定

使用本方法提纯的单宁纯度可达到95%以上。单宁含量的测定按照GB/T27985。

8注意事项

葡聚糖凝胶SephadexLH-20可重复使用。每次使用后用80%的乙醇洗3～5次，并用80%的乙醇浸

泡，在4℃条件下贮存，备用。

在纯化过程中，始终保持湿润，不可抽干。

丙酮回收后可重复使用。

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