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真核细胞罕有表达载体
真核细胞,表达载体
1.pCMVp-NEO-BAN载体
特色:该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,重要由CMVp启
动子.兔β-球蛋白基因内含子.聚腺嘌呤.氨青霉素抗性基因和抗
neo基因以及pBR322骨架构成,在大多半真核细胞内都能高水安
稳固地表达外源目标基因.更重要的是,因为该真核细胞表达载体
中抗neo基因消失,转染细胞后,用G418筛选,可树立稳固的.高表
达目标基因的细胞株.
拔出外源基因的克隆位点包含Sal1.BamH1和EcoR1位点.留意在
此载体中有二个EcoR1位点消失.
2.pEGFP,加强型绦色荧光蛋白表达载体(EnhancedFluorecent
ProteinVector)
特色:pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白,在PCMV启动子驱动
下,在真核细胞中高程度表达.载体骨架中的SV40origin使该载体
在任何表达SV40T抗原的真核细胞内进行复制.Neo抗性盒由
SV40早期启动子.Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-
TK基因的聚腺嘌呤旌旗灯号构成,能应用G418筛选稳固转染的真
核细胞株.此外,载体中的pUCorigin能包管该载体在大肠杆菌
中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗
性基因在大肠杆菌中的表达.
用处:该表达载体EGFP上游有Nde1.Eco47111和Age1克隆位点,
将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和EGFP的融会基因.
借此可肯定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位.
亦可用于检测克隆的启动子活性(代替CMV启动子,Acet1-Nhe1).
3.pEGFT-Actin,加强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体
特色:pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌
动蛋白基因,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高程度表达.载
体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40T抗原的真核
细胞内进行复制.Neo抗性盒由SV40早期启动子.Tn5的
neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤旌旗
灯号构成,能应用G418筛选稳固转染的真核细胞株.此外,载体中
的pUCorigin能包管该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达
盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的
表达.
用处:pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融会蛋白,
该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白,因而在活细胞和固定细胞
中不雅察到细胞内含肌动蛋白的亚细胞构造.
4.pSV2表达载体
特色：该表达质粒是以病责SV40启动子驱动在真核细胞目标基因
进行表达的,克隆位点为Hind111.SV40启动子具有组织/细胞的选
择特异性.此载体不含neo基因,故不克不及用来筛选.树立稳固的
表达细胞株.
5.CMV4表达载体
特色:该真核细胞表达载体由CMV启动子驱动,多克隆区域酶切位
点选择性较多.含有氨苄青霉素抗性基因和发展基因片段以及
SV40复制原点和fl单链复制原点.但值得留意的是,该表达载体
不含有neo基因,转染細胞后不克不及用G418筛选稳固的表达细
胞株.
其他经常应
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