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标准曲线测试注意事项

分析检测中测试标准曲线目的是可以根据标准曲线查出待测物质

的含量，所以标曲的制定是实验室工作中必不可少的工作。在真

实的实验过程中，测试标注曲线会遇到各式各样的问题，比如标

准曲线弯曲、线性不够好等问题，造成不同情况的原因是什么呢？

本文介绍一下。

测试要不要做平行样？应该怎样做平行样？常见原子吸

收分光光度计用途及测试事项分析，实验室原始记录错误如何修

改？检测报告有没有有效期？为什么要做能力验证？怎么做？关

于实验室作业指导书，盘点实验室能力验证常见不满意结果的原

因，检测方法的验证及确认，方法验证全知识点解读，如何做方

法验证，国家标准的规定。盘点实验室能力验证常见不满意结果

的原因，实验室溶液配制方法与技巧，化学分析方法确认和验证

指南。

前期测试注意事项

1、仪器校验好。

2、移取液体体积要精确，保证迅速准确，尽可能用一根移液管；

为减小人为误差同一种液体要一个人操作。

3、保证标准品的纯度，所用标准品最好是新打开的，纯度较高的

固体或溶液，防止污染。

4、容器要保证洁净。

5、根据标准品理化性质注意加样的先后顺序。

6、如果要测OD值，应保证测前各管液体充分混匀。

7、若还是有某个点误差较大，应舍弃。

8、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把

做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的

实验结果无从谈起。

9、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并

且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准

曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，

尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线

的范围内。

10、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样

就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

11、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对

低浓度的影响，提高准确性。

12、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。

13、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一

般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99

甚至是0.999。

测试标准曲线所遇问题

1、单色光纯度不够

问题：标准曲线上端向下弯曲。

措施：光度法中要求在最大吸收峰处测定吸光度，仪器的有效谱

带宽度越窄越好，有利于获得纯度高的单色光。

2.原子化器要在光路中心及焦点处，

如果试剂空白液复杂较校正空白差或对光的吸收和反射少一些，

则曲线的延线与纵坐标相交；反之，与横坐标相交。

3.样品反应和反应条件的问题，当样品反应的灵敏度不高时，被

测物低于某一浓度就不能显示出有效的读数，当浓度不同时，溶

液对光的吸收、散射的程度不同，低浓度段往往弯曲，加上浓度

高时部分胶体颗粒的聚沉，致使测定的吸光度降低，曲线上端向

下弯曲。

4.操作上的原因

问题：样品溶液的颜色不稳定、易褪色，若测试时间超过了稳定

时间，标准系列中高浓度溶液颜色减褪，致使曲线上端向下弯曲。

措施：控制好样品的加入时间，可以每加3份，停3～3min，再加

上3份，依次进行，以使每次测试时间相近。

5、干扰物质的影响

标准曲线检验，标准曲线的检验是实际操作中最大的难点，

也是工作中误区和争议最多的话题了。

最重要的三大检验项目：

1.精密度检验

标准曲线的精密度检验：

精密度检验就是看试验点距离拟合直线的距离有无异常，

所以也称线性检验（拟合检验），需用F检验，P0.05作为线性检

验合格的标准。

2.截距检验和斜率检验

标准曲线的截距检验和斜率检验分别考察Y=a+bX中a和b与

0的统计学差异，a与0有差别说明有试剂空白或系统误差，而b若

与0没差别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。3.标准曲线的

检验

应该是线性检验结合失拟检验，以及残差的正态性检验结

合才是统计学上比较完备的。

标准曲线使用中还遇到过哪些问题？

一：标准曲线需要减掉试剂空白来做吗？

答：不需要。仪器测出来标准系列的响应值可以减掉试剂空白或

减掉0管的响应值来做，工作中我们也常用0管来做仪器调零。其

实没有必要那么麻烦，即使空白或0管有响应值，在构建标准曲线

时，我们已经认为该响应值就是0浓度，也就是扣除了这个空白的。

二：标准曲线需要人为的增加(0,0)点吗？

答：不能。通常的标准系列多是配制0,1,2,3mg/L