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1、中国几大药源是什么?三大药源:化学药、中药、生物药:生化药物、
微生物药物、生物制品
2、生物药物、生物制药定义
生物药物:泛指包括生物制品在内的生物体的初级和次极代谢产物或生
物体的某一组成部分,甚至整个生物体用作诊断和治疗疾病的医药品。
生物技术制药:采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产
医药品。
3、生物药物分类:(1)重组DNA药物:应用重组DNA技术(包括基因
工程技术和蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。
(2)基因药物:以遗传物质DNA、RNA为物质基础制造的药物基因
治疗、基因疫苗、反义药物、核酶等(3)天然生物药物(4)合成或半
合成生物药物
4、几类抗生素的主要特性及生产菌种,了解提取工艺。
5、基因工程制药的主要程序?获得目的基因-组建重组质粒-构建基因
工程菌-培养工程菌-产物分离纯化-除菌过滤-半成品检定-成品检定-
包装
6、常用基因工程制药载体类型和特点?类型:克隆载体、转录载体、表
达载体
7、质粒不稳定的类型或表现形式?原因⑴含质粒菌产生不含质粒子代
菌的频率;质粒丢失率与宿主菌、质粒特性和培养条件有关。⑵两种
菌比生长速率差异的大小。分类:(1)分裂不稳定:指工程菌分裂时
出现一定比例不含质粒子代菌的现象(常见)。(2)结构不稳定:指外
源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。
8、质粒稳定性的分析方法:样品-不含抗性标记抗生素、平板培养基--
条件10-12h和100个菌落--含抗性标记抗生素、平板培养基--条件
10-12h--统计生长菌落数。重复三次,计算比值(稳定性stability)
9、为了提高质粒稳定性,工程菌培养采用什么方法?选择合适的宿主
菌、选择合适的载体拷贝数、选择压力只能消除分裂不稳定性。、两
阶段培养法菌体生长--诱导表达、调控环境参数-温度、pH、培养
基组分和溶解氧浓度、固定化
10、基因表达的宿主细胞分类?1、原核细胞:大肠杆菌、、枯草芽孢杆
菌、链霉菌2、真核细胞:酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞
11、克隆真核基因的常用方法?逆转录法和化学合成法。一、逆转录法:
逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA,再反转录成cDNA,然后进
行cDNA的克隆表达。⒈mRNA的纯化⒉cDNA第一链的合成⒊cDNA第
二链的合成⒋cDNA的克隆⒌将重组体导入宿主细胞:⒍cDNA文库的
鉴定:抗性基因失活法、噬菌斑颜色改变法⒎目的cDNA克隆的分离和
鉴定:核酸探针杂交法、免疫反应鉴定法。二、化学合成法:较小的
蛋白质或多肽的编码基因可以用化学合成法合成。必须知道目的基因的
核苷酸顺序或目的蛋白质的氨基酸顺序。再按相应的密码子推导出DNA
的核甘酸序列。用化学法合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷
酸短片段,再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段,然后将这些
双链片段按正确的次序进行退火使连接成较长的DNA片段,再用连接酶
连接成完整的基因。
12、对基因工程菌发酵影响较大的几个因素?1、培养基的影响2、接种
量的影响3、温度的影响:如重组人生长激素:30℃培养,产物可溶37℃
培养,形成包涵体。4、溶解氧的影响5、诱导时机的影响6、pH的影响
13、基因工程药物、肽图分析1、基因工程药物:A、胰岛素B、干扰
素C、人白细胞介素-22、肽图分析:是用酶法或化学法降解目的蛋白
质,对生成的肽段进行分离分析,它是检测蛋白质一级结构最有效的方
法,该技术灵敏高效是对基因工程药物的分子结构和遗传稳定性进行评
价和验证的首先方法。常用HPLC和毛细管电泳
14、单克隆抗体、多克隆抗体、抗体、免疫佐剂、双功能抗体
单克隆抗体定义:由单一克隆B细胞杂交瘤产生的,只识别抗原分子某
一特定抗原决定簇的特异性抗体。
多克隆抗体定义:指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原
决定簇的多种抗体混合物。
抗体:机体受抗原刺激后产生的,并且能与该抗原发生特异性结合的免
疫球蛋白。
免疫佐剂:由于不同个体对同一抗原的反应性不同,而且不同抗原产生
免疫反应的能力也有强有弱,因此常常在注射抗原的同时,加入能增强
抗原的抗原性物质
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