酶学分析技术.ppt

关于酶学分析技术酶是生物体内活细胞合成的具有高效、特异催化作功能的蛋白质。什么是酶enzyme?目前将生物催化剂分为两类:蛋白质酶、核酶（脱氧核酶）第2页,共29页，星期六，2024年，5月底物(substrate,S)：被催化的物质。产物(product,P)：反应生成的物质。酶促反应：酶催化的反应。酶活力：酶所具有的催化能力。几个有关名词丙氨酸谷氨酸第3页,共29页，星期六，2024年，5月常见酶类丙氨酸氨基转移酶ALT或GPT乳酸脱氢酶（LDH）天冬氨酸氨基转移酶（AST或GOT）肌酸激酶（CK）5′-核苷酸酶（5′-NT)α-羟丁酸脱氢酶（α-HBD)第4页,共29页，星期六，2024年，5月一、酶活性定义：酶活性（enzymeactivity）也称为酶活力，指酶促反应速率，即规定条件下在单位时间内产物的生成量或底物的减少量。表示方法：或式中v：反应速率，[P]：产物浓度，t：时间，[S]：底物浓度。注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的生成量为好。第5页,共29页，星期六，2024年，5月二、酶活性单位（一）酶活性单位定义：表示酶的相对含量，指在一定条件下，单位时间内生成一定量的产物或消耗一定量的底物所催化的酶量。表示方法：惯用单位（一定的反应量/一定的反应时间）国际单位IU（μmol/min）Katal单位（mol/s）第6页,共29页，星期六，2024年，5月1．惯用单位：20世纪60年代以前根据酶活性测定方法建立者的姓氏命名的单位ALP的金氏单位（King）氨基移转酶的卡门氏单位（Karmen）特点：各单位对温度、时间、物质量的定义不同，导致各测定值、参考范围相差很大，彼此间无法比较,现在临床应用较少。卡门氏单位：1.0ml血清在25℃，340nm，反应体积3.0ml,光径1.0cm时每分钟测定吸光度下降0.001，即消耗4.82?10-4μmolNADH为一个卡门氏单位举例：金氏单位：100ml血清ALP在37℃与底物作用15min，产生1mg酚。第7页,共29页，星期六，2024年，5月2.国际单位IU（μmol/min）定义：在规定条件下（25℃及其他最适条件），每min催化1μmol底物转变为产物的酶量，为1U，1U=1μmol/min。IFCC,2001年37℃3．Katal单位定义：1Katal是在规定条件下，每秒钟催化1mol底物转变为产物的酶量。1Katal＝1mol/s。IU与Katal单位的关系：1katal=60×106U，1U=16.67nkatal第8页,共29页，星期六，2024年，5月三、酶促反应动力学以产物生成量（或反应物减少量）为纵坐标、反应时间为横坐标作图所得到的一条曲线，称为反应进程曲线（或反应时间曲线、速率曲线、时间曲线）t1t2时间t图5-1酶促反应进程曲线吸光度A延滞期线性期非线性期第9页,共29页，星期六，2024年，5月（一）延滞期（lagphase、延迟期）特点：为反应的初始阶段，反应速率一开始时较慢，通常为几秒到几分钟t1t2时间t图5-1酶促反应进程曲线吸光度A线性期非线性期R1R2延滞期孵育期延滞期第10页,共29页，星期六，2024年，5月（二）线性期此阶段酶促反应速率基本保持恒定；对底物而言，为反应速率与底物浓度[S]的零次方成正比的零级反应，即不受底物浓度的影响，而只与酶活性浓度成正比；此时底物的消耗量小于5%，反应速率为反应初速率。酶活性浓度越高，线性期就越短线性度：判断线性期的一个指标，指吸光度（A）相对于时间（min）变化的可以接受的程度。线性度=［前半段△A/min－后半段△A/min］/［（前半段△A/min＋后半段△A/min）/2］×100％线性度值越小则线性越好。一般判断标准：不大于15％，否则判为非线性特点：可代表酶促反应速度第11页,共29页，星期六，2024年，5月（三）非线性期（偏离线性期、平坦期）进入非线性期的原因：反应的不断进行，底物消耗越来越多，酶变性失活增加、可逆反应增强、