食品微生物检验之纸片法.pdfVIP

食品微生物检验之纸片法

摘要：纸片法在食品检测的实际应用中表现出操作简便、灵敏度

高、速度快等特点，为食品检测技术的发展提供了有力的技术支持。

本文主要介绍了纸片法的原理和纸片法在食品中微生物检测中的

方法应用以及与平板计数法进行了对比研究。

关键词：食品检验纸片法平板计数法微生物检测

前言：

食品安全问题越来越受到人们的重视，微生物对食品的污染问题

也相应地备受关注。在食品生产、加工、储存、运输、销售等各个

环节中都有污染微生物的可能。一旦污染，微生物将大量繁殖而引

起食品腐败变质，或导致食源性感染和食物中毒，食品的检测与分

析工作已经提高到一个极其重要的地位。特别是为了保证食品的标

准品质，开展食品科学技术研究，寻找食品污染的根源，人们更需

要对食品进行各种有效营养物质和对人体有害、有毒物质的检验和

分析。自20世纪70年代起，各种食品检测不断出现，主要包生物

化学技术、纸片法等，目前这些技术在食品检测和分析等方面已经

得到了较好的应用，特别是纸片法。纸片法以其操作简便、灵敏度

高、速度快等优势在食品检测领域得到愈来愈广泛的应用[1，2]。

一、纸片法的原理

纸片法，即以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培

养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测

定微生物的方法[3]。快速测试片法有以滤纸为载体的测试片，这

种测试片是一种水合物干膜，由上下两层薄膜组成，上层是聚丙烯

薄膜，下层是上印有网格的聚乙烯薄膜，通过一种冷水可溶性的凝

胶剂附着在培养基上。培养基上有微生物生长所需的营养物质、特

异性显色物质和抗生素。

纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试

菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增

加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯

度。在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生

长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成

透明的抑菌圈。不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩

散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物

的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（mic）呈负相关，

即抑菌圈越大，mic越小。

二、纸片法的优、缺点及改进

本文介绍的是北京陆桥公司研制的easytesttm纸片（简称et），

et微生物测试纸片是一种将脱水培养基附着于无纺布棉垫上的即

用型检测产品，利用了特异性酶与特异性显色底物反应的原理，使

目标菌与非目标菌呈现可明显区别的不同特异性颜色，et测试纸片

的培养载体采用了无纺布和水溶性营养底物的设计，具有良好的吸

水性，可快速吸收测试液，使微生物自动均匀分布于无纺布上，为

测试液和营养底物创造了一个固定的混合区域。这种纸片法排除了

滤纸测试片不易计数、营养物质分布不均、显色指示剂单一和保水

性差的缺点，待测样品不需灭菌、本身带有培养基，样品可直接加

入。其特点可归纳为：可应用于现行gb/t4789-2008和sn标准中；

使用方便，即用型产品，省去配制步骤，减少工作量；大量缩短检

测时间，提高检测效率；降低对操作人员的技术要求；准确：灵敏

度高、特异性强；可用于食品微生物检测和环境卫生检测，可分别

检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数、金黄色葡萄球菌

计数。如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、

省料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，使用时应正确掌握操作

技术和判断标准，从而达到理想的检测效果[4]。

从实用性来说，et纸片省却了大量的玻璃器皿的麻烦，操作简便，

携带方便，污染小；可在野外迅速检测所采集样本，避免常规方法

因运输时间长而造成的菌落环境变化，更能反映采集样本真实菌落

情况；培养后所长的为有色菌落，便于计数。

纸片法也有其弊端，测试片较小，菌量数较大时计数困难；只研

制出了少数几种类型的测试片，只能局限于几个指标的检测上。

目前，对纸片法分改进主要是扩大被检测目标菌种种类；研制具

有检测较大菌量的纸片，并且提高检测准确性。神保胜彦[5]（1991）

对纸片法作了进一步研究和改进，改进后的纸片法不仅能够确定抗

生素的种类，而且提高了检出率和准确性