有哪些信誉好的足球投注网站- 1、本文档共17页，可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
高表达稳定细胞株的构建
高表达稳定细胞株的构建
高表达稳定细胞株的构建
高表达稳定细胞株的构建
实验的步骤：
1.GDF15基因的提取及PCR扩增
2.载体质粒的提取(细菌的培养和质粒的提取)
3.双酶切
4.连接
5.转化到细菌（感受态的制备）
6.双酶切鉴定，基因测序鉴定
7.扩大培养细菌和重组质粒提取
8.病毒制备
9.转染细胞筛选稳定表达GDF15蛋白的细胞
1GDF15基因的提取及PCR扩增
基因的提取及扩增
1GDF15PCR
Gdf15基因所在细胞的RNA的提取
反转录cDNA
Gdf15基因引物设计（注意要加上酶切位点序列）
PCR扩Gdf15基因
凝胶电泳及PCR产物回收
引物设计
引物设计
利用VectorNTI8.0软件设计NPM1基因序列扩增引物，
在引物两端分别加EcoRI、BamHI酶切位点和3个保护
碱基
引物名称序列
,FWDGCGGAATTCATGGAAGACTCGATGGATATGGACATG
,REVGCGGGATCCTTAAAGAGATTTCCTCCACTGCCAGAG
下划线标示出限制性酶切位点
2载体质粒的提取(细菌培养和质粒提取)
2载体质粒的提取细菌培养和质粒提取()
举例：2质粒
1细菌：pCDNA3.1质粒、pLJM1质
Stbl3菌株、DH5α菌株粒、V51-S3质粒
/
Addgene:pLJM1-EGFP
材料：
菌株的培养材料：
菌株的培养超净工作台、酒精灯、移液枪、
甘油菌种（-80度保存）1ml灭菌锅、试管、三角烧瓶、恒
方法一：温摇床
直接取10ul至4ml培养基中，
加上相抗生素，进行培养（试剂
37度250rpm培养12h左右）LB培养基：Tryptone10g/L，
然后做个菌落PCR，如果有目Yeastextract5g/L，NaCl5
的条带，拿去测序。当然如果g/L（ph7.4-7.6）
以前做过测序的话，就不需要抗生素：氨苄、卡那霉素
再测啦。
方法二：平板划线接种法
材料：
材料：
灭菌接种环灭菌锅、三角烧瓶、平板皿、超净工作台、
接种环、酒精灯、恒温培养箱、移液枪、
沾取标本试管、恒温摇床
接种划线试剂
37度培养过夜LB固体培养基：Tryptone10g/L，
Yeastextract5g/L，NaCl5g/L（ph7.4-
挑取单克隆7.6）琼脂1.5%
抗生素：氨苄、卡那霉素
注意：LB培养基12
文档评论（0）