细胞培养过程中苯乙烯单体、氯乙醇残留 量测定 GC-MS 法.pdf

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细胞培养过程中苯乙烯单体、2-氯乙醇残留量测定GC-MS法

警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题，

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件规定了细胞培养过程中测定苯乙烯单体、2-氯乙醇残留量的气相色谱-质谱方法。

本文件适用于各类细胞制剂培养及制备过程中所使用和接触材料如离心管、移液器、培养皿、培养

瓶、孔板等中苯乙烯单体、2-氯乙醇（ECH）迁移至培养液中的检测。

本文件的方法于苯乙烯单体检出限约为0.5μg/L，2-氯乙醇检出限为250μg/L。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GBT14233.1-2008医用输液、输血、注射器具检验方法第1部分：化学分析方法

GBT16886.7-2015医疗器械生物学评价第7部分：环氧乙烷灭菌残留量

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

细胞培养液接触材料Contactmaterialsduringcellpreparation

在正常使用条件下，各种已经或预期与细胞培养液接触的材料，包括但不限于可能在细胞分离、培

养、制备过程中与细胞发生接触的塑料器材等。

4原理

试样用甲醇溶剂提取后，用气相色谱-质谱法测定和确证苯乙烯单体和2-氯乙醇，内标工作曲线法

定量。

5试剂或材料

除非另有说明，本标准所用试剂均为色谱纯。水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1甲醇(色谱纯)

5.2单一标准品：苯乙烯、苯乙烯D8、2-氯乙醇，均为色谱级，纯度≥99.8%。

5.3单一标准储备液：配制好后于0℃～4℃下密封保存，有效期为3个月。

5.3.1苯乙烯(1mg/mL)：准确称量50mg标准品，于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为

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1mg/mL的对照储备液。取0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成10μg/mL溶液。

5.3.2苯乙烯D8(1mg/mL)：准确称量50mg标准品，于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓

度为1mg/mL的对照储备液。取0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度,配制成10μg/mL溶液。

5.3.32-氯乙醇(1mg/mL)：准确称量50mg标准品，于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度

为1mg/mL的对照储备液。

5.4混合标准储备液：分别准确吸取1mL苯乙烯(10μg/mL)，5mL2-氯乙醇(1mg/mL)于同一10mL

容量瓶中，加甲醇（4℃）定容至10mL，混匀，可多次定容后配制成浓度均为苯乙烯1μg/mL，2-氯乙

醇500μg/mL的混合标准储备液。配制好后于0℃～4℃下密封保存，有效期为3个月。

5.5内标工作溶液：准确吸取1mL苯乙烯D8(10μg/mL)，加甲醇（4℃）定容至10mL，混匀，配制

成浓度均为0.5μg/mL的内标工作液。

5.6标准工作溶液：取适量混合标准储备液(5.4)，用甲醇分别稀释一次稀释1、5、10、50、100、500

倍，得浓度分别为500(1.0)、100(0.2)、50(0.1)、10(0.02)、5(0.01)、1(0.002)μg/mL的标准溶液【2-氯

乙醇（苯乙烯）】，各配制10mL，现配现用。

6仪器设备

6.1气相色谱—质谱联用仪：配电子轰击源（EI源）。

6.2超声波清洗器。

6.3电子天平：精度为0.0001g和0.01mg。

6.4涡旋混合