甾体激素类药物的分析.ppt

检测器（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环280nm（±）雌激素1.四氮唑比色法2.异烟肼比色法3.Kober反应比色法（三）比色法肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性（1）原理1.四氮唑比色法有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH-[还原]三苯甲瓒↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）[H]黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化钠其他甾体淡橙色或不显色雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸（4）酚羟基含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银（5）炔烃的沉淀反应↓有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ（6）有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈蓝紫色一般先进行水解，生成相应的羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴别。（7）酯的反应△４-3-酮、苯环、其他共轭结构（二）UV法1.结构依据240nm左右280nm左右2.示例曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇20μg/ml浓度20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收，A为0.57～0.60，在239nm与263nm处的吸收度比值为2.25～2.45结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（三）IR法1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动ν结构特征：△４-3-酮、C17-甲酮基黄体酮1700cm-1?C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1?C-H双键（四）TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。（五）HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。硒的检查有关物质的检查残留溶剂的检查游离磷酸盐的检查三、特殊杂质检查（一）有关物质的检查检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.

检查方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色例：炔孕酮中有关物质的检查供试液：本品+氯仿-甲醇(3:1)浓度：10mg/ml对照液：供试液（10mg/ml）+氯仿-甲醇(3:1)浓度：50μg/ml层析：供试液点样、展开、斑点检出。

对照液判断：供试液如显杂质斑点，其荧光强度与对照溶液主斑点比较，不得更深。（2）HPLC法（主成分自身对照法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积药物二氨基萘比色法测定氧瓶燃烧(二）硒的检查有毒来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢（三）有机溶剂残留量的检查甲醇≤0.3％丙酮≤5.0%内标法+校正因子以地塞米松磷酸钠为例GC法供试液钼酸铵1-氨基-2-萘酚-4-磺酸.钼蓝：740nm对照液：同法要求：供试品溶液吸光度不得大于对照溶液吸光度（四）游离磷酸盐的检查（对照液0.0035%KH2PO4）比色法紫外分光光度法含量测定高效液相色谱法四、含量测定（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂示例：地塞米松磷酸钠的含量测定

色谱条件：固定相ODS，流动相三乙胺溶液-甲醇-乙腈（55:40:5）检测波长242nm系统适用性试验：n7000，地塞米松