急性经口毒性试验 固定剂量法.docx

AcuteOralToxicityTestTheFixed-DoseProcedure

1范围

本方法规定了动物急性经口毒性试验固定剂量法的基本原则、要求和方法。

本方法适用于化妆品原料安全性毒理学检测。

2试验目的

急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。

3定义

3.1急性经口毒性acuteoraltoxicity

一次或在24h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。

3.2经口半数致死量（LD50）mediumlethaldose

经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。

3.3延迟死亡delayeddeath

设定的给药间隔（通常为48h）内不引起受试动物死亡或出现濒死状态，但在14d的观察期间内出现死亡。

3.4限值剂量limitdose

受试动物进行急性经口毒性试验的上限剂量（2000mg/kg或5000mg/kg）。

4试验基本原则

本方法的原则是在使用最少动物数逐步进行试验，以获得受试物的急性毒性分级所需的充分结果。受试物按固定的剂量逐一以管饲法经口给予单只同性别动物（一般采用雌性），每个剂量染毒后根据动物毒性反应和死亡的结果来确定是否在更高剂量或更低剂量继续试验。并对染毒后所有动物进行解剖学检查，存在病理改变的器官考虑进行病理组织学检查。本方法主要适用于啮齿类动物的研究。

5试验方法

5.1受试物

受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中，建议首选水，其次考虑使用植物油（如玉米油）或其他介质（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）制成溶液、混悬液或乳浊液。对非水溶性介质，应了解其毒理特性，否则应在试验前先确定其毒性。每次经口染毒液体的最大容量取决于实验动物的大小，对啮齿类动物所给液体容量一般为1mL/100g，水溶液可至2mL/100g。通过调整受试物溶液浓度使各剂量组经口染毒的容量一致。受试物溶液一般要现用现配。

5.2实验动物和饲养环境

首选健康成年大鼠，也可选用其他啮齿动物，通常使用未孕和未曾产仔的雌性动物。假如有已知毒理学资料说明雄性动物可能对受试物更敏感，也可选用雄性动物并说明理由。实验动物开始试验时应为8-12周龄，体重之间相差不得超过平均体重的20%。试验前动物要在实验动物房环境中适应3～5d时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用标准配合饲料，饮水不限制。

5.3预实验步骤

5.3.1染毒前

动物需要禁食（大鼠禁食不禁水过夜，小鼠禁食不禁水3h～4h）。禁食后染毒前需要对动物进行称重，采用管饲法一次性染毒（如果不能一次染毒，可分次给予，但整体染毒时间不能超过24h）。染毒后仍需继续禁食（大鼠3h～4h，小鼠1h～2h）。如果染毒是分多次完成的，根据时间的长短，必要时可给动物提供一定量的水和食物。

5.3.2初始剂量和限量实验

根据相关毒理学资料，可以从5mg/kg，50mg/kg，300mg/kg，2000mg/kg中选择一个作为初始剂量，受试物的毒性资料可以通过其类似化合物或类似混合物（根据性质和所占的比例判断受试物所占的毒性重要性）的毒性资料获得。如受试物无毒理学资料，一般从300mg/kg作为初始剂量进行预实验。如果现有毒理学资料提示受试物可能无毒的情况下（致死量高于限值剂量），可进行限量试验。

如有要求或需要，可采用5000mg/kg剂量进行限量试验，可按附录A中的试验准则进行。如结果为A，则第二只动物在2000mg/kg剂量试验；如出现B或C（明显毒性或无毒性）则选择5000mg/kg作为正式试验的初始剂量。对于2000mg/kg剂量的试验结果出现B或C，应将试验推进至5000mg/kg，如5000mg/kg试验结果为A，则正式试验起始剂量为2000mg/kg，如结果为B或C，则正式试验起始剂量为5000mg/kg。

5.3.3观察及结果解释

每次取1只动物，按照附录A进行预试验，观察记录染毒后动物的毒性表现，观察间隔24h后，进行另一只动物染毒，所有试验动物观察至少14d。

预试验的结果为正式试验提供初始剂量。预试验中，如果在最低剂量（5mg/kg）动物发生死亡，根据试验程序，应立即停止试验，将该物质判定为GHS急性毒性分级1类（见附录A）。为了获取更为准确的结果，应选取第二只动物按照5mg/kg染毒，如果第二只动物死亡，结束试验，将该物质判定为1类；如该动物未死亡，最