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水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学文件编号：第1页共1页
水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学报告
起始日期：2018年月日结束日期：2018年月日
一、实验目的
掌握水中总大肠菌群的测定方法及原理。
二、依据标准文献
GB/T5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标2多管发酵法
三、适用范围生活饮用水及水源水总大肠菌群的测定。
四、方法原理
总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革
兰氏阴性无芽孢杆菌。多管发酵法的原理是根据统计学理论，通过三个步骤进行检验求得水
样中的总大肠菌群数，估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。试验结果以最可能数
（mostprobablenumber，）简称MPN表示。计算出数量/L。
五、仪器设备
(1)立式压力蒸气灭菌器型号：YXQ-LS-50SII容积：50升
恒温培养箱，超净工作台。
(2)
酒精灯、镍铬丝接种棒。
(3)
培养皿（直径100mm、）试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL、）烧杯
(4)
(5)（200、500、2000mL）、锥形瓶（250、1000mL、）采样瓶。
六、试剂材料
培养基：乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基，营养琼脂。
操作人：复核人：批准人：
水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学文件编号：第2页共2页
七、实验步骤
1.试验准备
乳糖蛋白胨培养液：按瓶上标志配制好液体培养基后，取10支20毫升试管，5支30毫升试管，
内置小导管。5支30毫升试管加入10mL2倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，10管加入10mL单倍
浓度的乳糖蛋白胨培养液，试管加硅胶塞。
伊红美蓝培养基：按瓶上标志配制好300mL液体培养基后，倒入锥形瓶500mL中，加硅胶塞。
营养琼脂：
按瓶上标志配制好200mL液体培养基后，倒入锥形瓶500mL中，加硅胶塞。
取采样瓶多个，接种棒，培养皿35对，密封包装。
以上物品材料于121℃高压灭菌器中灭菌30min备用。
2.样品测定
取500mL锥形瓶内的营养琼脂液体培养基，倒入约20mL灭菌好的培养皿中，超净工作台不同位
置各放1对，共10对，操作间不同位置各各放1对，共10对。开盖，30分钟后盖上，检测操
作环境是否被污染。
①初发酵试验：在5个装有已灭菌的10mL2倍浓缩乳糖蛋白胨培养液试管中（内有倒
管），以无菌操作各加入已充分混匀的水样10mL。在5支装有已灭菌的10mL乳糖蛋白胨培
养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样1mL，在5支装有已灭菌的10mL
乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样0.1mL，混匀后置
于37℃恒温箱内培养24h。
操作人：复核人：批准人：
水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学文件编号：第3页共3页
组别培养基管数量水样接种量
110mL2倍浓缩乳糖蛋白胨培养液试管中（内有倒管）5支10mL
210mL乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）5支1mL
310mL乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）5支0.1mL
如所有乳糖蛋白胨培养液发酵管都不产酸产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产酸产气
者，则按下列
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