药敏试验扩散法操作方法.ppt

细菌因素细菌层的薄厚细菌的生长特性培养基培养基厚度水的质量PH值培养基成分培养条件培养时间的长短培养温度药敏片药物含量的多少试纸片材质第31页,共33页，星期六，2024年，5月应用1、在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。高敏药物一定要配合适宜的给药方法。2、药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70－80%。如发现疗效不显著应及时换药。3、药敏试验确定的首选药物不是一成不变。要定期进行药敏试验。4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素，一种抗生素可达到治疗作用时，不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时，应选择联合应用具有协同作用的药物。5、避开已经使用过的药物或其同类药物，发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。6、加强饲养管理，提高卫生条件，能起到很好的辅助治疗作用第32页,共33页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第33页,共33页，星期六，2024年，5月关于药敏试验扩散法操作方法一、概念抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。（1）MIC：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于8倍为妥。（2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合MIC可以方便地制定用药方案。敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌药物血液浓度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。第2页,共33页，星期六，2024年，5月意义：1、检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。避免盲目用药、滥用药、大剂量用药。2、监测耐药性，分析耐药菌变迁，了解某一地区致病菌的耐药变迁、流行病学调查及监控，控制和预防耐药菌株的流行3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药”肯定失败4、新抗菌药的研究第3页,共33页，星期六，2024年，5月以下情况不需进行药敏测定：标本污染细菌，非致病菌引起已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少有耐药菌产生已知细菌全部耐药的药物对营养要求高而不易生长的细菌第4页,共33页，星期六，2024年，5月二、常用的药敏测定方法1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。纸片法手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上广泛使用此法。定性2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏试验的方法。定量3、E测定法（Etest）：与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。4、全自动药敏仪法：第5页,共33页，星期六，2024年，5月三、试验准备及用品药品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、培养基、平皿（直径90mm）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文具店有售）、0.5麦氏比浊管配制方法：0.048MBaCL2(1.17%W/VBaCL2.2H2O)0.5ml0.36NH2SO4(1%,V/V)99.5ml将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。第6页,共33页，星期六，2024年，5月1、培养基MH肉汤（MHB）Mueller-HintonBroth用途：用于抗生素敏感试验配方：（g/L）牛肉粉2.0?可溶性淀粉1.5?酸水解酪蛋白17.5pH值7.4?±?0.2???????25℃原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物。用法：称取本品21.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。MH琼脂（MHA）Mueller-HintonAgar用途：用于抗生素敏感试验配