咖啡酸苯乙酯调制幽门螺杆菌诱发核药化生药学谢.pptx

CaffeicacidphenethylestermodulatesHelicobacterpylori-induced

nuclearfactor-kappaBandactivatorprotein-1expression

ingastricepithelialcells

咖啡酸苯乙酯调制幽门螺杆菌诱发的核因子κB和激活蛋白-1在胃上皮细胞中的表达

百链输入moleculartarget在结果中找到一篇综述从中找到了引用文献

PossiblemoleculartargetsfortherapeuticapplicationsofcaffeicacidphenethylesterininflammationandcancerCAPE在治疗炎症和癌症中可能的分子靶点

咖啡酸衍生物——咖啡酸苯乙酯（CAPE），被认为对各种疾病具有良好的治疗潜力，如炎症，肿瘤，感染，和神经退行性疾病。这种具有自然的生物活性，疏水性的多酚类酯存在于许多植物和蜂胶中，也可以用咖啡酸苯乙醇反应制备。CAPE的分子式为C17H16O4。

CAPE的可能分子靶点包括各种转录因子，比如核因子，组织坏死因子-α，白细胞介素-6，环氧化酶-2

核因子κB（NF-κB）体系主要涉及机体防御反应、组织损伤和应激、细胞分化和凋亡以及肿瘤生长抑制过程的信息传递。在多数细胞浆内NF-κB与抑制蛋白结合或无活性复合物，当信息物质作用于相应受体后，磷酸化抑制蛋白使NF-κB脱落而活化，NF-κB进入胞核影响基因转录。

EMSA(Electrophoreticmobilityshiftassay)凝胶迁移原理凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

1.按如下顺序加入反应物，温和混匀（20μl体系）ddw――10×bindingbuffer2μlPoly(dI.dC)1μl核蛋白粗提物4－10μg（温和混匀）生物素标记的探针0.5μl室温反应20min，加入6×LoadingBuffer(TAKARA)4μl，上样10－20μl，100V电泳至溴酚蓝于三分之二处。2.电转前将尼龙膜浸泡于0.5×TBE至少10min以预冷的0.5×TBE为电转缓冲液100V转胶于尼龙膜上，45min。3.UVBOX下，以贴近膜一面面向紫外光源，以254nm激发光交联15min（紫外交联仪1200能量，照2次）

4.加入25mLBlockingBuffer，以约70rpm在脱色摇床上封闭30min5.将SA-HRP以1:30000-50000稀释于12mLBlockingBuffer，脱色摇床70rpm作用20min(洗膜过程全部在脱色摇床上进行,约100-140prm)6.BufferII25ml,5min7.washbuffer25ml15min8.BufferIII25ml5min×2次9.0.1%SDSin2×SSC,5min×2次10.0.1%SDSin1×SSC,10min×2次11.0.1%SDSin0.5×SSC,5min×2次12.将膜于滤纸稍适吸干，加入到以1:20稀释的发光反应液(宁波奥唯)，作用1-5min，将尼龙膜封于保