色谱分析—柱色谱（分析化学课件）.pptx

柱色谱应用;（一）液-固吸附柱色谱法（liquid-solidadsorptionchromatography）;1.吸附剂

吸附剂为多孔性微粒物质。常用的有硅胶、氧化铝、聚酰胺和大孔吸附树脂等。

需满足以下条件：

具有较大的吸附表面和吸附中心；

与样品、溶剂和洗脱剂均不发生化学反应；

不能被溶剂或洗脱剂溶解；

粒度均匀，且有一定的粒度。;（1）硅胶适用于酸性或中性物质

（2）氧化铝

碱性氧化铝pH9.0～10.0适于分析碱性、中性物质

中性氧化铝pH＞7.5适于分析酸性碱性和中性物质

酸性氧化铝pH4.0～5.0适于分析酸性、中性物质

（3）聚酰胺氢键作用，氢键能力↑强，组分越后出柱。

注：吸附剂含水量越大，活性级别越高，吸附活性越低，吸附能力越弱。常用的活化方法是加热除水。

（4）大孔吸附树脂

;;;3.操作方法

（1）装柱（干法和湿法）

柱装的要均匀，不能有缝隙或气泡，以免??响分离效果。

（2）加样

（3）洗脱

洗脱剂可以是一种溶剂或混合溶剂。在洗脱过程中应不断加入

洗脱剂，保持色谱柱顶有一定高度的液面，控制好洗脱剂的流速。

;（二）液-液分配色谱（liquid-liquidadsorptionchromatography）

1.全多孔型担体

由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；;3.化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。

特点:稳定，耐水、耐光和耐有机溶，是目前应用最广、性能最佳的固定相。

a.硅氧碳键型：≡Si—O—C

b.硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si—C

c.硅碳键型：≡Si—C

d.硅氮键型：≡Si—N

;化学键合固定相的特点：

（1）传质快:表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；

（2）寿命长:化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定；

（4）选择性好:可键合不同官能团，提高选择性；

（5）有利于梯度洗脱；

存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理)高覆盖率：分配为主；低覆盖率：吸附为主；;（三）离子交换色谱（ion-exchangechromatography）

原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；

固定??：阴离子或阳离子离子交换树脂；

流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；

阳离子交换：R-SO3H+M+=R-SO3M+H+

阴离子交换：R-NR4OH+X-=R-NR4X+OH-

应用：离子、可离解的化合物、氨基酸和核酸等。;固定相结构类别：

薄壳型离子交换树脂

担体：薄壳玻璃珠，表面涂约1%的离子交换树脂；

离子交换键合固定相

薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团）

树脂类别：

阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性）

阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性）;（四）离子对色谱（ionpairchromatography）;（五）分子排斥色谱（size-exclusionchromatography）;A;（六）亲和色谱（Affinitychromatograph）

原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。

先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。