医用口罩及材料病毒过滤效率测试方法 Phi-X174噬菌体气溶胶法 征求意见稿.docx

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医用口罩及材料病毒过滤效率测试方法Phi-X174噬菌体气溶胶法

1范围

本文件规定了利用噬菌体Phi-X174作为模式微生物，对医用口罩及材料进行病毒气溶胶过滤效率测

试的方法。

试的方法。

本文件适用于有病毒过滤效率评价需求的医用口罩及材料。其它产品或材料的病毒过滤效率测试可参考本文件。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

YY/T0689-2008血液和体液防护装备防护服材料抗血液传播病原体穿透性能测试Phi-X174噬菌体试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

噬菌体bacteriophage感染细菌的一种病毒。

注：本文件中噬菌体即指Phi-X174。

3.2

裂解lysis

由于噬菌体增殖导致的宿主细菌被溶解破坏的过程。

注：本方法中，大肠杆菌作为宿主细胞因Phi-X174感染而引起裂解。

3.3

噬菌斑plaque

理论上由单个噬菌体感染裂解宿主细胞导致在平板上层琼脂上形成的肉眼可见透亮区域。

3.4

噬菌斑形成单位plaque-formingunit;PFU

能够感染裂解平板上层琼脂生长的细菌，产生噬菌斑的病毒粒子。3.5

滴度titre

活性噬菌体浓度，用每毫升噬菌斑形成单位表示（PFU/ml）。3.6

病毒过滤效率viralfiltrationefficiency;VFE

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在规定检测条件下，测试样品滤除空气中病毒颗粒的百分比。

4原理

噬菌体气溶胶与病毒气溶胶具有相似的空气生物学特性，本文件使用噬菌体作为替代微生物进行病毒气溶胶过滤效率的评价。在规定检测流量下，使一定浓度的噬菌体气溶胶颗粒，通过待测样品，分别检测通过样品前和通过样品后的噬菌体气溶胶颗粒浓度，计算该样品对噬菌体气溶胶颗粒的过滤效率作

为病毒过滤效率。

为病毒过滤效率。

5试验条件

除特别要求外，检测应在温度为16℃~32℃,相对湿度为（50±30）%的环境中进行。

6样品数量和预处理条件

在温度为（21±5）℃、相对湿度为（85±5）%的环境中放置至少4h，或者按照其它文件中的要求进行样品预处理。

7噬菌体增殖

7.1噬菌体和宿主菌

7.1.1噬菌体：Phi-X174，ATCC13706-B1或CICC80006。

7.1.2宿主菌：大肠杆菌，ATCC13706或CICC25123。

7.2培养基

7.2.1噬菌体营养肉汤

胰蛋白胨8g

氯化钾5g

氯化钙0.2g

加纯水至1000mL

最终pH值为7.3±0.2（25℃)

7.2.2下层琼脂

琼脂15g

营养肉汤8g

氯化钾5g

加纯水至1000mL

氯化钙1mL（1mol/L，灭菌后加入）

最终pH值为7.3±0.2（25℃)

7.2.3上层琼脂

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琼脂7g

营养肉汤8g

氯化钾5g

加纯水至1000mL

氯化钙1mL（1mol/L，灭菌后加入）

最终pH值为7.3±0.2（25℃)

7.2.41%蛋白胨水

配方/1000mL

10

10g

5g

1000mL

氯化钠

加纯水至

最终pH值为7.3±0.2（25℃)

7.3噬菌体增殖

7.3.1噬菌体悬液的制备

按照YY/T0689-2008中规定的方法或者以下步骤，制备噬菌体悬液。

a)用接种环将大肠杆菌（7.1.2）接种于噬菌体营养肉汤培养基（7.2.1）中，在温度为（36±1）℃、转速为（225±25）r/min条件下过夜培养。

b)准备直径为150mm的无菌平皿，倒入下层琼脂培养基（7.2.2），使培养基凝固。

c)挑取单个噬菌斑，放入1mL噬菌体营养肉汤中，震荡使噬菌体悬浮，4℃9000×g离心10min，将上清液吸出至另一容器中。

d)