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循环肿瘤DNA突变检测技术指南（高通量测序法）

1范围

本文件提供了采用高通量测序进行血浆样本循环肿瘤DNA突变的检测流程、阳性判断值的设定、

性能确认、结果报告等方面的指导。

本文件适用于采用高通量测序进行循环肿瘤DNA突变检测的技术。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T43584.2—2023生物技术大规模并行测序第2部分：测序数据的质量评估

GB/T43279.3—2023分子体外诊断检验静脉全血检验前过程的规范第3部分：分离血浆循环游离

DNA

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

游离DNAcellfreeDNA；cfDNA

以单链、双链或环状的形式存在于血浆、尿液、脑脊液等体液中的降解DNA片段。

循环肿瘤DNAcirculatingtumorDNA；ctDNA

由肿瘤细胞主动分泌或在肿瘤细胞凋亡或坏死过程中释放进入体液中的DNA片段。

高通量测序high-throughputsequencing；HTS

下一代测序next-generationsequencing；NGS

区别于传统Sanger（双脱氧法）测序，能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术。

[来源：GB/T30989—2014,3.19,有修改]。

文库library

对生物来源的核酸片段和人工合成的接头序列的连接产物进行PCR扩增得到的克隆核酸分子群。

[来源：GB/T30989—2014,3.5,有修改]

唯一分子标签uniquemolecularidentifier；UMI

唯一分子标签是一段随机或特定的核苷酸短序列，可特异性地标记文库中的每个分子。

突变等位基因频率variantallelefrequency；VAF

基因位点的等位基因中发生突变的比例。

注：又可称突变频率。

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碱基质量值phredqualityscore

每个碱基被正确识别的概率。通常用碱基识别错误率的对数值表示。

[来源：GB/T30989—2014,3.29,有修改]

注：质量值为30的碱基识别错误率为0.1%，或准确率为99.9%。Q30指碱基质量值大于30的碱基占全部测序碱基的百

分比。

捕获效率captureefficiency

所测得目标区域的序列数占所有测序序列的百分比。

测序数据量sequencingdatasize

测序的碱基数量。

注：根据测序序列长度、序列总数和单端/双端测序推算测序数据量，单位为G。

测序深度depth

在一次测序中，某碱基位点被测序的次数。

有效测序深度uniquesequencingdepth

原始数据经过过滤和去除重复序列之后的测序深度。

分子残留病灶molecularresidualdisease；MRD

经过治疗后，少量的肿瘤细胞仍然残留在体内。

注：传统影像学或其他实验室方法未能发现，但通过分子检测分析可揭示肿瘤来源的异常分子残余，提示肿瘤持续

存在和临床进展可能。

克隆造血clonalhematopoiesis；CH

外周血存在来源于突变的造血干细胞或祖细胞且具有优势增生能力的血细胞群。

注：与年龄增加有关。

4预期用途

预期用途需明确适用的肿瘤类型、样本类型、检测范围（热点突变或检测区域和突变类型）、检测

方法以及临床意义，如药物选择、治疗监测等，并明确适用疾病、药物（如适用）等。

5标本的采集、运输、预处理和保存

概述

实验室需确认采血管、采集后（至血浆分离前）全血标本保存温度和时间、血浆分离流程、分离后

血浆保存温度和时间以及血浆中干扰物质对检测的影响，基于性能确认的结果，建立标本的采集、运输、

预处理、保存和质量要求。

标本采集