农业部2031号公告-8-2013 转基因植物及其产品成分检测 大豆内标准基因定性PCR方法.docx

ICS65.020B04

中华人民共和国国家标准

农业部2031号公告—8-2013

转基因植物及其产品成分检测大豆内标准基因定性PCR方法

Detectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—Target-taxon-specificqualitativePCRmethodforsoybean

2013-12-04发布2013-12-04实施

中华人民共和国农业部

发布

I

农业部2031号公告—8-2013

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会(SAC/TC276)归口。

本标准起草单位：农业部科技发展中心、吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：张明、宋贵文、李飞武、李葱葱、赵欣、董立明、闫伟、邢珍娟、宋新元、刘娜。

1

农业部2031号公告—82013

转基因植物及其产品成分检测大豆内标准基因定性PCR方法

1范围

本标准规定了大豆内标准基因Lectin的定性PCR检测方法。

本标准适用于转基因植物及其制品中大豆成分的定性PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样

农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

Lectin基因Lectingene

编码大豆凝集素的基因。

4原理

根据Lectin基因序列设计特异性引物及探针，对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期的DNA片段或典型的荧光扩增曲线，判断样品中是否含有大豆成分。

5试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。

5.1琼脂糖。

5.210g/L溴化乙锭溶液：称取1.0g溴化乙锭(EB),溶解于100mL水中，避光保存。

警告——溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。

5.310mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠(NaOH),溶解后，冷却至室温，再加水定容到200mL。

5.4500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取18.6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na?),加入70mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液(5.3),加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化钠溶液(5.3)调pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.51mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶解于

800mL水中，用盐酸(HCl)调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.6TE缓冲液(pH8.0):分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷—盐酸溶液(5.5)和2mL乙二铵四乙酸

2

农业部2031号公告—8—2013

二钠溶液(5.4),加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.750×TAE缓冲液：称取242.2g三羟甲基氨基甲烷(Tris),先用500mL水加热搅拌溶解后，加入100mL乙二铵四乙酸二钠溶液(5.4),用冰乙酸调pH至8.0,然后加水定容到1000mL。使用时，用水稀释成1×TAE。

5.8加样缓冲液：称取250.0mg溴酚蓝，加入10mL水，在室温下溶解12h;称取250.0mg二甲基苯腈蓝，加10mL水溶解；称取50.0g蔗糖，加30mL水溶解。混合以上三种溶液，加水定容至100mL,在4℃下保存。

5.9DNA分子量