解脲支原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR荧光法)说明书.docVIP

解脲支原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR荧光法)说明书

具有FAM荧光通道的ABI7000型荧光PCR扩增仪。【产品名称】

通用名:解脲支原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR荧光法)【样本要求】

英文名:UreaplasmaUrealyticumpolymerasechainreaction(PCR)Fluorescence1.标本:男性尿道拭子样本或女性宫颈拭子样本

2.采集容器:应当选用国家批准生产的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子应当包括套DiagnosticKit管、棉签杆、塞子，棉签杆与塞子都应连接牢固。【包装规格】32人份/盒3.采集:样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。【预期用途】【男性】先清洁尿道口，要求病人在采样前2小时不能排尿。取尿道分泌物或细小棉拭子伸入可作为临床实验室对男性尿道拭子样本或女性宫颈拭子样本中解脲支原体核酸定性检测，为临尿道约2-4cm，略捻拭子取出分泌物(应略带黏膜)。将分泌物或棉拭子置入无菌玻床早期发现尿道炎或子宫颈炎及性病高危人群的筛查提供分子生物学上的参考依据。璃管，密闭送检。适应症:由解脲支原体感染引起的尿道炎及宫颈炎【女性】先用棉/麻拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，用扩阴器扩阴，再换取棉拭子伸入宫颈，【检验原理】通过上皮交界处，直到看不到拭子头，旋转10-20秒，取出拭子，将拭子置入无菌玻本试剂盒选用解脲支原体(UU)保守基因片段设计特异引物及特异Taqman探针，该探针能与引璃管中，密闭送检。物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活4.存放:2-8?保存，不超过24小时;-20?下保存，不超过3个月;-70?下长期保存，但应性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团避免反复冻融。的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲支5.运输:采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。原体(UU)核酸的自动化检测。【检验方法】【主要组成成份】1.样本处理【样本处理区】组成成分规格(1)标本试管中加入1ml无菌生理盐水(冻存标本使用前在室温融解并充分混匀)，充分震荡摇含0.4MNaCl、10mMNaOH、0.5%NP-40、匀，吸取液体转至1.5ml离心管中，12000rpm离心5分钟。弃上清取沉淀加入50μl核酸核酸提取液1.8ml×10.5%Triton-100、5%Chelex-100提取液(内含固体沉淀颗粒物，为使颗粒均匀分布，每次取样时请用吸头反复吸打)，混匀

含Tris-HCl(pH8.9)10mmol/L、KCl50mmol/L、MgCl2后2000rpm离心10sec，100?水浴或干浴10min，12000rpm离心10min，上清供PCR扩

4mmol/L、dTTP、dATP、dGTP、dCTP各100umol/L、增用(如样本裂解产物当天不使用，请于-20?保存)。UU反应混合液1.2ml×1引物A100nmol/L、引物B100nmol/L、探针(2)阴性对照、阳性对照直接取出50μl，加入50μl核酸提取液，混匀后100?水浴或干浴10min。

75nmol/L、BSA200ug/ml12000rpm离心10min，备用。

Taq酶含TaqDNA酶及抗体14ul×12.试剂配制【试剂准备区】

UU阳性对照主要成份为UU基因组DNA(重组克隆)100ul×1从试剂盒中取出UU反应混合液，在室温下融化并振荡混匀后，2000rpm离心10sec。计阴性对照主要成份为0.9%NaCL100ul×1算需准备反应试剂人份数[n=样本数+2管对照品]。每人份反应体系配制如下:

试剂UU反应混合液Taq酶注:不同批号试剂盒中各组份不可以互换

用量35.6μl0.4μl【储存条件及有效期】

试剂-20?可保存12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融计算上述各试剂的使用量，加入一适当体积的离心管中，充分混匀后，按36μl量分装到不得超过三次。PCR反应管中，转移至样本处理区。

【适用仪器】3.加样【样本处理区】

1

分别加入4μl的阴性对照、UU阳性对照、样品处理上清液，盖紧反应管，转移至检测区。9.实验中用过的吸头请直接打入盛有1%的次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌

4.PCR扩增及荧光检测【PCR检测区】后丢弃。

将各反应管按一定顺序放入PCR仪上，按以下程序进行PCR扩增:10.工作台及各种