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    EXPERIMENT5

    ACID-FASTSTAININGANDMORPHOLOGICALOBSERVATIONOFSPORE-FORMING

    GRAM-POSITIVEBACILLI

    ACID-FASTSTAININGOFMYCOBACTERIUM.TUBERCULOSIS

    BIOLOGICALCHARACTERISTICSOFT.Bslim/slender,straightorslightlycurved,sometimesbranchedbacilli.appearirregularforms:granularandfilamentouspossessacomplex,lipid-richcellwall.obligateaerobes,growmuchmoreslowlythanmostotherbacteria(generationtime:18~24h).morehighlyresistanttosomephysicalandchemicalagentsthanmostotherbacteria.

    MycobacteriumtuberculosisAsanobligateaerobicorganismM.tuberculosiscanonlysurviveinanenvironmentcontainingoxygen.Thisbacteriumrangesinlengthbetween2~4microns,andawidthbetween0.2~0.5microns.

    Mycobacteriumtuberculosisbacteriausingacid-fastZiehl-Neelsenstain;Magnified1000X.

    Theacid-faststainsdependontheabilityofmycobacteriatoretaindyewhentreatedwithmineralacidoranacid-alcoholsolutionsuchastheZiehl-NeelsenstainsthatarecarbolfuchsinmethodsspecificforM.tuberculosis.

    ACID-FASTNESSOFM.TUBERCULOSISThecellwallofmycobacteriahaveaveryhighlipidconcentration,includingmycolicacid,sulfatide,etc.Theycan’tbeeasilystainedbyconventionalmethods.?Harshtreatmentsareusedtostainthem.Oncestained,itisdifficulttoremovethedyebyvigorousdecolorizingagentsuchasacidalcohol.Thepresenceofmycolicacidandotherlipidsoutsidethepeptidoglycanlayermakesmycobacteriaacid-fast.

    Inadditiontopeptidoglycan,theacid-fastcellwallofMycobacteriumcontainsalargeamountofglycolipids,especiallymycolicacids.Thepeptidoglycanlayerislinkedtoarabinogalactan(D-arabinoseandD-galactose)whichisthenlinkedtohigh-molecularweightmycolicacids.Thearabinogalactan/mycolicacidlayerisoverlaidwithalayerofpolypeptidesandmycolicacidsconsistingoffreelipids,glycolipids,andpeptidoglycolipids.

    THREEREAGENTSINACID-FASTSTAIN

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