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EnzymeLinkedImmunosorbentAssay(ELISA)
InVitroAg-AbReactionClassicaltechniquesAgglutinationreactionPrecipitationreactionComplement-mediatedhemolysisImmunolabellingTechniquesImmunoflurescencetechniqueRadioimmunoassayEnzymelinkedimmunosorbentAssay(ELISA)……..
PrinciplesofELISA：AgorAbkeepsitsbiologicalactivitiesafterbindingtosolidphasecarrierorbeinglabelledwithenzymes.TheenzymelinkedtoAgorAbcancatalyseitssubstrateandproducecolorfulproduct.TheintensityofcolorisassociatedwiththeconcentrationofAgorAb.Methods：Double-Absandwich,indirectmethod,competitivemethod…..
Double-AbsandwichAssayfortestingalphafetalprotein(AFP)
EEAFP(Ag)Anti-AFPAb2Anti-AFPAb1SolidphasePrinciple
竞争法
AFPkit:standardsample（0,25,50,100,200,400ng/ml）,anti-AFPAb2,substrate(hydrogenperoxide),chromogenicreagent(tetramethylbenzidine),H2SO4forstoppingreaction,washingsolution.AFPsamplefrompatients:Serumtobetested.DDW:doubledistilledwatermicroplatereader、37℃oven.Materials
Methods1.coatthewellwithanti-AFPAb1(done).2.AddAFP(Ag)tothewells:50ul/wellStandardsample:0、25、50、100、200、400ng/ml3.AddAnti-AFPAb2:50ultoeachwell,keptat37℃30min.4.washing:discardthesolution,wash5times.Thefirsttimewith2dropsofwashingsolution,theotherfourtimeswithDW.Finallydrythewellbypattingthewellontissuepaper.5.developingcolor:addsubstrateandchromogenicreagent1dropeachtothewell，slightshakingandkeptindarkroomfor5-10min.6.Stopreaction:add100ulof1MH2SO4tostopthereaction.7.OpticalDensity(OD)valueismeasuredatamicroplatereaderat450nm.
well1234567Ag(ng/ml)50ul050ul2550ul5050ul10050ul20050ul40050ulSample50ulAnti-AFPAb250ul50ul50ul50ul50ul50ul50ulsubstrate1drop1drop1
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