一种四价亚单位流感疫苗及其制备方法[发明专利].pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN106668854A

(43)申请公布日

2017.05.17

(21)申请号201611206901.1

(22)申请日2016.12.23

(71)申请人江苏中慧元通生物科技有限公司

地址225312江苏省泰州市医药城杏林路

28号疫苗中心

(72)发明人安有才付作申张玉辉于海龙

陈辉黎刘鹏刘冰冰安蕊

徐奇冷文娜陈晓芬

(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限

公司11002

代理人王文君

(51)Int.Cl.

A61K39/145(2006.01)

A61P31/16(2006.01)

权利要求书2页说明书12页附图1页

(54)发明名称

一种四价亚单位流感疫苗及其制备方法

(57)摘要

本发明涉及生物制药领域，具体公开了一种

四价亚单位流感疫苗及其制备方法。所用毒种分

别是H1N1型(NYMC

X-179A)，H3N2型(NIB-88)，BY

型(B/Phuket)，BV型(NYMC

BX-35)。毒种经鸡胚

培养，通过尿囊液收获、澄清、浓缩、纯化等步骤

制备出单价病毒原液，然后将四个不同血清型的

病毒单价原液按一定稀释点配比，制备出四价亚

单位流感疫苗样品。该四价亚单位疫苗样品中较

低的卵清蛋白含量和较低的甲醛及裂解剂残留

量，保证了四价亚单位疫苗的不良反应更低，提

高了疫苗的安全性。同时，四价亚单位疫苗相比

现有的三价疫苗增加了一个BV血清型，针对不同

A血清型流感的流行具有更宽泛的防御保护范围。

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6

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N

C

CN106668854A权利要求书1/2页

1.一种四价亚单位流感疫苗，其特征在于，由H1N1型、H3N2型、BY型和BV型的病毒单价

原液制备而成；

所述疫苗中H1N1型、H3N2型、BY型和BV型的血凝素含量均为26.4μg-39.6μg/mL。

2.根据权利要求1所述的四价亚单位流感疫苗，其特征在于，所述病毒单价原液由毒种

经鸡胚培养、通过尿囊液收获、澄清、浓缩、裂解、纯化后得到；

其中，浓缩步骤具体为：

1)将单型流感病毒的尿囊收获液经离心澄清后，用100万截留分子量超滤膜对其进行

超滤浓缩，浓缩倍数20～60倍。

3.根据权利要求2所述的四价亚单位流感疫苗，其特征在于，所述裂解步骤具体为：

1)将浓缩后的病毒液置于浓度不高于1.5％的裂解剂Triton

N101/蔗糖溶液中，于15

～25℃条件下，裂解3.5～4.5h；裂解的同时进行蔗糖密度梯度离心，根据紫外吸收曲线收

集目的蛋白峰，收集蔗糖浓度为9％～20％之间的蛋白峰；

或2)：

将浓缩后的病毒液置于浓度不高于1.5％的裂解剂Triton

N101中，于15～25℃条件

下，裂解0.5～2h；裂解后的病毒液在疏水层析柱Hi

Trap

PhenylFF(high

sub)进行分离纯

化，上样缓冲液为50mmol/L

PBS+1.5mol/L(NH)SO(pH7.0)，含硫酸铵100％，另设50mmol/

424

L

PBS中含硫酸铵为0，适量上样后以保证柱压的流速从设定的硫酸铵含量100％至0速递减

洗脱，以280nm波长进行监测，并收集蛋白峰。

4.根据权利要求3所述的四价亚单位流感疫苗，其特征在于，进行蔗糖密度梯