《人体血液中5种雷帕霉素靶蛋白类抑制剂药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法》.pdfVIP

人体血液中5种雷帕霉素靶蛋白类抑制剂药物含量的测定

高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了人体血液中5种雷帕霉素靶蛋白类抑制剂药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方

法。

本文件适用于人体血液中维妥色替，AZD8055，GDC-0941，依维莫司，替西罗莫司含量的测定。

2规范性引用文件

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文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品用乙腈提取、无水硫酸镁盐析、十八烷基键合硅胶（C18）净化后，涡旋混匀、冷冻离心、氮

吹复溶，进行液相色谱-质谱/质谱法测定，内标法定量。

5试剂和材料

5.1试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1.1甲醇：色谱纯。

5.1.2乙腈：色谱纯。

5.1.3甲酸：色谱纯。

5.1.4无水硫酸镁。

1

5.1.5N-丙基乙二胺（PSA）。

5.1.6标准品：维妥色替（CAS号：1009298-59-2），AZD8055（CAS号：1009298-09-2），GDC-0941

（CAS号：957054-30-7），依维莫司（CAS号：159351-69-6），替西罗莫司（CAS号：162635-04-3），

他克莫司（CAS号：104987-11-3）纯度均≥98%。

5.1.7混合标准储备溶液的配制：分别称取维妥色替，AZD8055，GDC-0941，依维莫司，替西罗莫司

1mg（精确到0.01mg)，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分别配制成维妥色替，

AZD8055，GDC-0941，依维莫司，替西罗莫司的储备溶液，于-20℃保存至分析。

5.1.8标准中间溶液的配制：取500μL标准储备溶液（5.1.7）至50mL量瓶中，加甲醇稀释，混匀，

得到1μg/mL的标准中间溶液于-20℃保存备用。

5.1.9内标储备液的配制：称取1mg（精确到0.01mg)他克莫司，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并

定容至刻度，得到0.1mg/mL的内标储备液，于-20℃保存至分析。

5.1.100.1%（体积分数）甲酸水溶液：准确移取甲酸1.0mL置于1L量瓶中，用水定容，混匀。

6仪器设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

6.2氮吹浓缩仪。

6.3涡旋震荡仪。

6.4电子分析天平（精度0.01mg)。

6.5高速冷冻离心机（最高转速22000rpm）。

7试样制备

全部血液样本充分混匀后，在4℃、3000r/min条件下离心10min，取管内上清液分装，-80℃储存

待测。

8试验步骤

8.1试样预处理

取200μL血液试样（7）于5mL离心管中，准确加入2mL乙腈、400mg无水MgSO和30mgC18

4

进行盐析和净化，涡旋混匀30s后，经12000r/min，4℃的冷冻离心10min。取出200μL上清液，氮

吹浓缩至干，加入500μL含有内标的甲醇溶液作为复溶溶剂，复溶后涡旋混匀30s，过0.22μm微孔

2

滤膜，待测定。

8.2标准曲线

取相应的空白样品，按照7步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将混合标准储备溶液逐级稀

释，得到维妥色替、AZD8055、GDC-0941浓度为1、2、5、10、20、80ng/mL，依维莫司浓度为2.5、

5、12.5、25、50、200ng/mL，替西罗莫司浓度为10、20、50、50、100、200、80