《人体血液中卡瑞利珠药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法》.pdfVIP

人体血液中卡瑞利珠药物含量的测定

高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了人体血液中卡瑞利珠药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方法。

本文件适用于人体血液中卡瑞利珠药物含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适

用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品经甲醇沉淀后用100mM的碳酸氢铵溶液复溶，加入100mMDTT和200mMIAM后酶解过

夜，进行液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

5试剂和材料

5.1试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1.1甲醇：色谱纯。

5.1.2乙腈：色谱纯。

5.1.3甲酸：色谱纯。

5.1.4100mM碳酸氢铵溶液：取158.1mg碳酸氢铵（精确到0.01mg）溶于20mL量瓶中，用水定

容至刻度。

1

5.1.5100mMDTT溶液：取DTT（MW154.3）154mg（精确到0.01mg）于10mL量瓶中，用100

mM的碳酸氢铵溶液（5.1.4）定容至刻度。

5.1.6200mMIAM溶液：取IAM（MW185.0）370mg（精确到0.01mg）于10mL量瓶中，用100

mM的碳酸氢铵溶液（5.1.4）定容至刻度。

5.1.71mg/mL胰酶溶液。

5.1.8标准品：卡瑞利珠的纯度大于等于98%（CAS号：1798286-48-2）。

5.1.9标准储备溶液的配制：取卡瑞利珠1mg（精确到0.01mg）于1.5mL离心管中，加入500µL

100mM碳酸氢铵溶液（5.1.4），配制成卡瑞利珠的储备溶液，于-20℃保存至分析。

5.1.100.1%（体积分数）甲酸水溶液：准确移取甲酸1.0mL置于1L量瓶中，用水定容至刻度，混

匀。

6仪器设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

6.2恒温水浴锅。

6.3涡旋振荡器。

6.4电子分析天平（精度0.01mg）。

6.5高速冷冻离心机（最高转速22000rpm）。

7试样制备

全部血液样本充分混匀后，在4℃、3000r/min条件下离心10min，取管内上清液分装，-80℃储

存待测。

8试验步骤

8.1试样预处理

取100μL血液试样（7）于1.5mL离心管中，准确加入100μL甲醇沉淀血液中的蛋白，涡旋混匀2min，

在17000r/min，4℃的条件下冷冻离心20min，弃去上清液后加入200μL100mM碳酸氢铵溶液（5.1.4）

复溶；加100mMDTT溶液（5.1.5）适量，使终浓度为5mM，在56℃下孵育30min；室温冷却后加200

mMIAM溶液（5.1.6）适量，使终浓度为10mM，避光静置15min。最后加入4μL胰酶溶液，在37℃

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下孵育过夜12h后加入1μL甲酸终止酶解反应，经17000r/min，4℃冷冻离心20min，将100μL上清转

移至洁净干燥的液相小瓶，进机分析。

8.2标准曲线

取相应的空白样品，按照7步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将标准储备溶液逐级稀释

以制备一系列浓度为4、10、15、20、40、80、100和160µg/mL的卡瑞利珠药物。得到的系列标准工

作溶液，浓度由低到高进行检测，以定量离子峰面积对质量浓度作图，做出标准曲线回归方程。

8.3仪器参考条件

8.3.1液相色谱参考条件

a.色谱柱：AgilentPoroshell120EC-C18（2.1×100mm，1.9µm），或相当者。

b.流动相：