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2025版新高考新教材版选考总复习生物专题22基因工程专题22基因工程

五年高考考点1重组DNA技术的基本工具

1.(2023重庆，12,3分)某小组通过PCR[假设引物长度为8个碱基(短于实际长度)]获得了含有目的基因的DNA

片段，并用限制酶进行酶切(如图),再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是(B)限制酶识别序列

得扩增E8E

片段5-CFACCAAccrcATGAACMCc-

A.其中一个引物序列为5-TGCGCAGT-3

B.步骤①所用的酶是SpeI和CfoI

C.用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2个片段

D.酶切片段和载体连接时，可使用E.coli连接酶或T4连接酶

2.(2022福建，21节选，4分)美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14的单克隆抗体，具体方

法如下。回答下列问题：

(一)基因工程抗原的制备

启动子Xho

启动子

XhoI

载体

终止子

抗性基因

(1)根据美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR扩增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3-OH与加入的脱氧核苷酸的5-P形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是_5→3(填“5→3”或

“3→5”)。

(2)载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切序列如图所示。用XhoI和SalI分别酶切CD14和载体后连接，CD14接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA。可进一步用这两种限制酶对CD14的连

接方向进行鉴定，理由是正向连接的重组DNA有这两种酶切位点(限制酶的识别序列):而反向连接的重组DNA会形成新的序列没有这两种酶的酶切位点(没有限制酶的识别序列)0

(3)培养能表达CD14蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。

考点2基因工程的基本操作程序及应用考向1DNA的粗提取、PCR、电泳鉴定

3.(2024黑、吉、辽，7,2分)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是(A)

A.琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小

B.凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置

C.在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快

D.琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来

4.(2024山东，13,2分)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是(A)

A.整个提取过程中可以不使用离心机

B.研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中

C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变

D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰

5.(2024山东，5,2分)制备荧光标记的DNA探针时，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大肠杆菌DNA聚合酶、扩增缓冲液、H?O和4种脱氧核苷酸(dCTP、dTTP、dGTP和碱基被荧光标记的dATP)的反应管①~④中，分别加入如表所示的适量单链DNA。已知形成的双链DNA区遵循碱基互补配对原则，且在本实验的温度条件下不能产生小于9个连续碱基对的双链DNA区。能得到带有荧光标记的DNA探针的反应管有(D)

反应管

加入的单链DNA

①

5-GCCGATCTTTATA-33-GACCGCCTAGAAA-5

②

5-AGAGCCAATTGGC-3

③

5-ATTTCCCGATCCG-33-AGGGCTAGGCATA-5

④

5-TTCACTGGCCAGT-3

A.①②B.②③C.①④D.③④

6.(2023福建，4,2分)关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”(实验I)和“DNA的粗提取与鉴定”(实验Ⅱ)的实验操作，下列相关叙述正确的是(C)

A.实验I中，PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理

B.实验I中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，加样前应先接通电源

C.实验Ⅱ中，取洋葱研磨液的上清液，加入等体积冷酒精后析出粗提取的DNA

D.实验Ⅱ中，将白色丝状物直接加入二苯胺试剂中并进行沸水浴，用于鉴定DNA

7.(2022辽宁，12,2分)抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是(B)

预变性

预变性变性

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