南方医科大学第二章5.ppt

*（四）糖连接位置的测定1、化学方法：多采用甲基化法首先将糖链全甲基化，然后水解所有的苷键，用气相色谱法对水解产物—甲基化单糖—进行定性和定量分析。①定性分析：需要选择各种单糖的标准品②计算各甲基化产物相互之间的比例，推测糖链重复单位中各种单糖的数目①全甲基化②水解2、NMR谱法①13CNMR谱法：是目前用来确定糖的连接位置的常用方法※该法是在归属各碳信号的基础上，以游离苷元和甲基糖苷作为参考化合物，确定产生苷化位移的碳，然后利用苷化位移规则，即可方便地获知各单糖的连接位置。②1HNMR谱法：首先是使糖与苷先乙酰化，接着比较不同类型质子的化学位移值。例如：CHOAc中CH质子的化学位移为4.75~5.4ppm;而CH2OAc、CH2OR中质子的化学位移在3.0~4.3ppm；端基质子的化学位移介于这两者之间。最后通过2D-NMR就可判定质子的归属，从而得出糖的连接位点。（五）糖链连接顺序的决定1、经典方法：部分水解法※过程：多糖→部分水解→低聚糖→分析低聚糖连接顺序→推测糖链连接顺序2、驰豫时间法※基本原理：外侧糖的自旋晶格驰豫时间T1比内侧大，同一糖上各碳的自旋晶格驰豫时间T1则基本相同。3、质谱分析法※先了解糖的组成，再根据质谱裂解规律和化合物的裂解碎片推测低聚糖及其苷中糖链的连接顺序。※可解决低聚糖及其苷中糖链的连接顺序，但难于准确确定糖链的连接位置。※要求低聚糖及其苷中的糖不能是同一类糖。4、现代方法：NMR与2D-NMR法在归属各个碳原子与H原子信号的基础上，利用HMBC（异核多键相关）、NOESY（二维NOE谱）等波谱技术，通过观察相连碳氢或HH远程偶合，推断糖链的连接顺序与连接位置。（六）苷键构型及氧环的确定1、苷键构型测定方法如下：⑴.分子旋光差法（klyne法）⑵.酶催化水解方法例如：麦芽糖酶只能水解α-苷键；苦杏仁酶只能水解β-苷键等。⑶1H-NMR判断糖苷键的相对构型通过C1-H与C2-H的偶合常数来判断苷键的构型.例如：D-吡喃糖，α-苷键：JH1-H2=2-4Hzβ-苷键：JH1-H2=6-8Hz⑷13C-NMR判断糖苷键的构型通过C1-H1偶合常数来判断苷键的构型.例如：D-葡萄吡喃甲苷，α-苷键：JC1-H1=170Hzβ-苷键：JC1-H1=160Hz3、糖氧环大小的测定①根据13CNMR数据来判断例如：吡喃糖环中13C3-NMR信号在72-78ppm;呋喃糖环中13C3-NMR信号在80ppm以上。②分析Smith降解产物也可判断氧环的大小。③利用甲醇解反应来判断呋喃型糖甲苷与吡喃型糖甲苷色谱行为不同。二、糖链结构研究实例——皂角苷A的结构测定1、皂角苷A为无定形粉末，是九糖三萜皂苷。2、HR-FAB-MS负离子源测得分子量为：1831.7649[M-H]-3、结合13CNMR、DEPT谱确定皂角苷A分子式为：C82H128O454、有关1HNMR数据：δ4.89(1H,d,J=7.3Hz),δ4.99(2H,d,J=7.6Hz),δ5.13(2H,d,J=7.1Hz),δ5.32(1H,d,J=7.7Hz),δ5.55(1H,d,J=7.3Hz),δ5.93(1H,d,J=8.2Hz),δ6.29(1H,s).5、有关13CNMR数据：δ94.4,δ100.9,δ103.8,δ104.2,δ104.9,δ105.5,δ105.8,δ106.2,δ106.9.※在δ100ppm处有9个吸收峰，说明皂角苷A分子结构中含9个单糖。6、碱水解结果：获得一个三糖苷（次级苷）※??说明皂角苷A分子结构中通过酯苷键连有一个六糖结构。7、酸水解后，再经过气相色谱分析，结果如下：①??皂角苷A中所含单糖为夫糖、半乳糖、木糖、鸡纳糖与鼠李糖；②?各单糖相互间的分子比为1：1：4：1：18、薄层酸水解后，与标准品对照证明皂角苷A中尚含有另一个单糖——葡萄糖醛酸。9、将酸水解后所得苷元再经过各种波谱数据对照证明，确认该苷元为皂