电泳分离血清蛋白实验报告.pdfVIP

竭诚为您提供优质文档/双击可除

电泳分离血清蛋白实验报告

篇一：醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告

前言

血清蛋白：

血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或

者需要建造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中，脂

肪酸被血清蛋白获取，并被运送到需要的部位。

牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别，

它不是一定的，是多聚物，有的地方测的70000，这就是一

个数据了。在做pcR的时候会用到它。

牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量68kD。等电点

4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂

量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个

半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。

白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血

115

液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、ph缓冲作用、载体作

用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起

到生理和机械保护作用和载体作用。

醋酸纤维薄膜电泳：

醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维

素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮

等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以

0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄

则膜片缺少应有的机械强度则易碎。

应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广

泛用于血

清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋

白，类固醇激素及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力

比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。

特点：

1.（1）醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖

尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离

清晰，因而提高了测定的精确性。

（2）快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小，

薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用小，电泳时大部分

电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般

电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需

215

90min左右。

（3）灵敏度高，样品用量少。血清蛋白仅需2μl血清，

甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg蛋白样品也可得到清

晰的分离带。临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下

微量异常蛋白的改变。

（4）应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎

儿甲种球蛋白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜

电泳能较好地分离。

（5）醋酸纤维薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合

液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及

长期保存。

2、醋酸纤维薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操

作简单，但分离效果不太好。如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜

电泳中，只能分离出5—6条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳

可分离出数10条区带。

一、实验目的

1.掌握电泳法分离血清蛋白质的原理；

2.掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法。

二、实验原理

1.电泳：是指带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的

电极移动的现象。

在一定ph条件下，不同的蛋白质由于具有不同的等电

315

点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方

向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可

使它们分离

2.影响电泳迁移率的因素：

内在因素：蛋白所带净电荷的量、蛋白的大小和形状

外界因素：电场强度、溶液的ph值、溶液的离子强度

和电渗现象

3.血清中各种蛋白质的等