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医学免疫学实验指导
病原生物与免疫学教研室
实验一免疫系统组织和细胞形态学
一、实验目的
观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞
二、实验内容
机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。该系统具有识别和排除抗原性
异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能,是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。
本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。小鼠是啮齿目中体形较小
的动物,淋巴系统很发达,包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。
本实验在带教老师指导下,解剖小鼠,观察胸腺、脾脏等免疫器官,并制血涂片,观察小鼠
免疫细胞。
(一)小鼠免疫器官解剖学观察
【材料】
1动物:昆明种小白鼠。
2试剂:3%来苏尔水,瑞特氏染液。
3器材:眼科镊,眼科剪,玻片。
【方法】
1小鼠脱臼处死,投入盛有3%来苏尔水的缸内,浸泡5分钟。取出小鼠,仰卧位置
于试验台上,使动物腹部朝上。
2以镊子提起耻骨处皮肤,用剪刀沿正中线直剪开至下颌部,然后钝性分离皮肤,再
把皮肤向四肢剪开。
3注意观察腹壁,用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开,观察腹腔液量及性状,观察脾
脏。
4切开膈肌,剪断胸骨,翻起胸骨,观察胸腺、心脏及肺脏,胸腺位于小鼠胸腔心脏前上
方,内有许多大淋巴细胞(即前胸腺细胞)及特定的上皮网状细胞(分泌胸腺激素)。
5解剖结束,深埋动物。
(二)免疫细胞的形态观察
【材料】
1动物:昆明种小白鼠。
2试剂:3%来苏尔水,瑞特氏染液,pH8.6硫酸盐缓冲液,20%盐酸甲醇。
3器材:眼科镊,眼科剪,玻片。
【方法】
1准备洁净玻片两张,一张用于推片,另一张用于固定标本。
2剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血,迅速在玻片上涂血膜制备血涂片,自然干燥。
3瑞氏染色
(1)染色:甲醇固定标本2分钟(亦可省略),滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜,染色1分
钟,再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水,用洗耳球吹打,使之与染液混匀,静置
染色8~10分钟,弃去染料,水洗。
(2)脱色:用20%盐酸甲醇脱色,肉眼观察玻片呈粉红色为宜,显微镜下观察结果。
4细胞特征
T细胞:T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成的,是淋巴细胞中数量最多、功能最复杂
的一类细胞,占外周血液淋巴细胞总数的75%~80%。T细胞体积较小,胞质少,核呈圆形,
常在一侧有小凹陷,染色质呈块状,较致密,故着色较深。多数T细胞寿命较长,可存活数
月至数年或更长。在抗原刺激下,T细胞经过多次分裂增殖,形成效应性T细胞。效应性T
细胞的存活期短,具有杀伤靶细胞的能力,但必须与靶细胞结合才能产生免疫效应。
B细胞:B细胞由骨髓中的淋巴干细胞分化而成,占血中淋巴细胞总数的10%~15%,数量
较少。细胞体积比T淋巴细胞略大。B细胞的结构,在光镜下与T细胞难以区别。B细胞生
存期一般较短,可存活数周或数月,也有寿命长达数年的。当B细胞受到抗原刺激后,增殖
分化为大量浆细胞。浆细胞可合成和分泌抗体(免疫球蛋白),抗体在血液中循环。通过抗
体与抗原结合,可中和毒素,抑制细菌或靶细胞的代谢,溶解靶细胞,从而清除相应抗原并
促进巨噬细胞吞噬抗原。
NK细胞:自然杀伤细胞,由骨髓中淋巴干细胞分化而来,占血中淋巴细胞总数的2%~5%,
在人体内分布广泛,以外周血和脾、淋巴结中NK细胞活性最高。在中空器官的管壁固有层
和一些实质性器官的间质中,均有NK细胞存在。在骨髓中NK细胞活性较低。NK细胞是大
淋巴细胞,平均直径为12~15μm,胞质较多,在胞质内有许多大小不等的嗜天青颗粒,故
又称大颗粒淋巴细胞,核呈卵圆形。NK细胞不需抗原激活,更不需抗体的协助,它可直接
杀伤靶细胞,例如杀伤被病毒感染的细胞和肿瘤细胞,NK细胞的这种抗感染和抗肿瘤的杀
伤作用是广谱的。
DC:树突状细胞,是一类形状不规则的非单核吞噬系统细胞,特点是胞浆有许多长突起呈
触须状,使整个细胞的形态像一个蜘蛛。树突状细胞分散于全身的上皮组织和实质性器官,
其细胞数量不超过局部细胞总数的1%;也可迁移到血液和淋巴,其数量不超过血液有核细
胞总数的0.1%。树突状细胞的吞噬能力较弱,但细胞表面积大,且有丰富的MHCⅡ类分子,
所以捕获抗原和递呈抗原的能力很强。
单核巨噬细胞:单核细胞发生于骨髓的多能干细胞,循环于血液中,穿透血管内皮进入组织
内,转变为巨噬细胞。单核吞噬细胞系统在体内分布广,细胞数量多,主要分布于疏松结缔
组织、肝、脾、淋巴结
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