仪器分析课程论文.pdfVIP

色谱分析技术在植科专业相关实验和教学中的应用

2011—2012学年第一学期

课程名称：仪器分析

班级：09级植物科学与技术（2）班

学号：

学生姓名：

摘要：本文通过对色谱分析的一些方法的简要分析和与我们植物保护学院植物科学与技

术专业的联系来向大家论述相关知识和信息。我们专业有许多实验都要借助于色谱分析方

法才能够圆满的完成相关实验。因此，色谱分析技术在我们专业能够得到很好的运用与发

挥。同时也因为色谱分析方法的发展才引领了科技的进步，进而取得了一系列的科技成果。

关键词：色谱；实验；化学；应用

正文：

一、色谱分析法的起源、分类及其原理

1、色谱分析法的起源[1]色谱法起源于20世纪初，1906年俄国植物学家米

哈伊尔·茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，

经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散为

数条平行的色带。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此茨

维特将这种方法命名为Хроматография，这个单词最终被英语等

拼音语言接受，成为色谱法的名称。汉语中的色谱也是对这个单词的意译。

[2]

2、色谱分析法的分类色谱分析法根据流动性的性质可以分为：气相色谱分

析法和高效液相色谱分析法两种。气相色谱分析法具有高分离效能、高检测性

能、分析时间快等优点，因此应用比较广泛。而高效液相色谱分析法也因其高

效、快速而得以广泛应用。根据物质的分离机制，又可以分为吸附色谱、分配

色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等类别。

3、色谱分析法的简单原理[3]色谱分析法是一种利用混合物中诸组分在两相间

的分配原理以获得分离的方法。其过程的本质是待分离物质分子在固定相和流

动相之间分配平衡的过程，不同的物质在两相之间的分配会不同，这使其随流

动相运动速度各不相同，随着流动相的运动，混合物中的不同组分在固定相上

相互分离。

二、色谱分析法在相关学习实验中的应用

1、植物生理学相关实验

（1）、叶绿素的提取与分离实验[4]先从菠菜叶片中，用有机溶剂将叶片中的色素提

取出来；然后利用纸层析，在圆形的滤纸中心用毛细管进行点样（少量多次，

尽量均匀，形状规则）；再以汽油做扩散剂将叶绿素进行扩散，进而得到叶片内

色素的主要成份。此试验应用的纸层析法是色谱分析法的一种较常用的方法，

不仅见效快、成本低、现象明显、重复性强，而且易于操作，适合于教学研究

和学生实验，同时也有利于色谱分析法的发展。

（2）、植物组织呼吸强度及呼吸商的测定的实验[5]用直径4mm和2000mm的色谱柱装

上担体。采用热导检测器[6]检测，柱温为60℃，进样器温为40℃，以氦气为载

气，气体流速为20ml/min；再用微量注射器分别抽取不同量的纯O和纯CO，注

22

入气相色谱仪中，并记录O和CO出峰时间和不同量的峰值。进而描绘出进样量

22

中O和CO的绝对量和峰值的标准曲线。然后运用相关知识计算植物组织呼吸强

22

度及呼吸商的测定的实验。

2、分子生物学相关实验

(1)、糖蛋白的分离和纯化实验[7]糖蛋白是存在与植物体内的一种大分子化合物，

本实验主要运用三种色谱柱（SepharoseCL－6B、S－Sepharose、SynChropakRP

－PC）依次进行分离和纯化。首先，使用SepharoseCL－6B色谱柱进行初步

16

的分离，然后再将流出液通过S－Sepharose色谱柱进行初步的纯化，使得样品

中的各组分的分离更彻底，最后用SynChropakRP－PC色谱柱进行最终的纯化，