人类布鲁氏菌病的PCR诊断技术研究进展∗.pdf

2015年第3l卷第3期包头医学院学报

Vo1．31No．32015JournalofBaotouMedicalCollege129

人类布鲁氏菌病的PCR诊断技术研究进展

赵越，王英，于慧，王占黎

(包头医学院，内蒙古包头014060)

摘要PCR是体外基因扩增技术，已广泛应用于感染性疾病的诊断。采用PCR进行病原体的检测、基因分型和定量等具有多种

优点，如高敏感性、高特异性、重复性好、操作简单等。布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌属(Brucella)细菌侵入机体所引发的传染一

变态反应性人畜共患传染病。目前世界上仍有一些发展中国家受到布病的危害。细菌培养和血清学检测是目前常用的人类布鲁氏菌

病实验室诊断技术。细菌培养相对费时，往往会延误诊断及早期治疗；血清学诊断缺乏国际化的参考标准，具有有诊断学意义的血清布

鲁氏菌抗体滴度尚未确定。PCR技术可对少量的布鲁氏菌作出快速诊断，是目前诊断人类布病的有效方法之一。本文就PCR主要技术

及其在人类布病诊断中的应用作一综述。

关键词布鲁氏菌病；PCR；实验室诊断

聚合酶链式反应(PCR)特异性强、灵敏度高、简便、快速、为了区分牛疫苗株S19和从野生株分离到的RB51，在原始的

对标本的纯度要求低，目前已成为人类布鲁氏菌病分子生物学AMOS—PCR的基础上加入了三对新的引物。根据这个AMOS

诊断的重要手段。—PCR格式，又设计加入了一对新的引物，来鉴定牛种3b、5、6

1单引物PCR和9型…。AMOS—PCR检测方法尽管只能对4个种的某些生

用PCR法在属水平上鉴定布鲁氏菌，引物包括编码BCSP物型布氏菌准确鉴定，但这些茵是国内主要流行菌株，鉴定结

一31序列的(B4／B5)，omp2(JPF／JPR)，16SrRNA(F4／R2)，果与传统方法符合率较高，操作安全且简单快速，可以作为布

IS71I(IS313／IS639)，16S一23S内源转录间隔区氏菌快速鉴定的辅助试验之一_2J。L6pez—GoniI等用多重

(BmITS—S／BruITS—A)，per(bmcl／bmc5)，夕膜蛋白(ompPCR法(Bruce—ladder)在种水平上鉴定所有的布鲁氏菌，包括

2b，omp2a和omp31)，omp25／omp31家族的布鲁氏菌蛋白，分泌6种陆生种、海洋种以及疫苗株S19、RB51、Rev．1。在此基础

蛋白VirB8和随机引物。不同引物的灵敏性和特异性差异很上，Mayer—Scholl等改进的多重PCR已能鉴别目前已知的

大，其中编码BCSP一31序列的(B4／B5)常用于人类布病的诊9个布鲁氏菌种。

断：以血液为样本，增加反应的循环数，会对引物表现出很高的随机扩增多态性DNAPCR可用于鉴别种和型水平上的引

灵敏性。Leal—KlevezasDS等根据编码bcsp一31和外膜蛋白物。据此设计的19对引物用于多重PCR能特异性鉴别布

(omp2b、omp2a、omp31)序列设计了4对引物，以不同的组合用鲁氏菌沙林鼠种、鳍型布鲁氏菌、鲸型布鲁氏菌和田鼠型布鲁

于4种不同的PCR体系中鉴别牛种、羊种、犬种和猪种布鲁氏

氏菌，同时还能区分牛种的1、2、4型与3、5、6、9型以及猪种1、

菌。此法也被认为是检测人布鲁杆菌的理想方法。HinicV等

3、4型和2、5型，这种方法鉴定的结果与以前的布鲁氏菌分型

报道了一种7个单重PCR反应检测布鲁杆菌6个种型的方法

结果(包括所有参考菌株和118株野毒株中的大多数)相一致。

(B．micro