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蛋白质组学与分析技术课复习思考题终结

蛋白质组学与分析技术课复习思考题终结

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蛋白质组学与分析技术课复习思考题终结

蛋白质组学与分析技术复习思考题

名词解释

1.蛋白质组学：是研究与基因对应的蛋白质组的学科。指一种基因组所表达的全套蛋白质，即包括一个基因组、一种细胞或组织，乃至一种生物所表达的全部蛋白质。

对应于基因组的所有蛋白质构成的整体，不是局限于一个或几个蛋白质；其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。

双向电泳原理：根据蛋白质的等电点和相对分子质量的特异性将蛋白质混合物在第一个方向上按照等电点高低进行分离（等点聚焦（），在第二个方向上按照相对分子质量大小进行分离（凝胶电泳（））

二维电泳分离后的蛋白质点经显色，通过图象扫描存档，最后是呈现出来的是二维方向排列的，呈漫天星状的小原点，每个点代表一个蛋白质。

三步纯化策略：=1\*3\*①粗提：分离、浓缩和稳定样品；把蛋白质从原来的组织和细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来的天然活性。=2\*3\*②中度纯化：取出大部分杂质；一般使用盐析、等电点沉淀、有机溶剂分级分离和超滤等。=3\*3\*③精细纯化：进一步纯化、达到最高纯度。一般使用凝胶过滤、离子交换层析等层析技术。

4.高效液相色谱：是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。在蛋白组学的研究中可以从复杂混合物中分离某种蛋白质组分

5.吸附色谱：又叫液固色谱，流动相是液体，吸附剂是固相；当混合物随着流动相通过吸附剂时，由于吸附剂对不同物质有不同的吸附力而使混合物分离。这是一种早期的色谱分离技术，主要适用于分子量不大的物质的分离。

6.扩增：即聚合酶链式反应，是体外酶促合成特异片段的一种方法，由高温变性、低温退火与适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目的得以迅速扩增。

7基因组文库：基因文库()，也称基因组文库（）：这是一种直接从基因组中分离目的基因的方法。即用适当的方法将某一种生物细胞的整个基因组切割成大小合适的片段，并将这些片段与适当的载体进行体外重组，在引入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增，从而形成含有重组分子的群体。

从理论上讲，这些重组子应包含整个基因组序列，即包含某种生物细胞的全部基因。因此，称之为基因组文库，或基因文库。

8.文库：细胞全部逆转录成并被克隆的总和。

基因芯片：又叫芯片（)，微阵列（),集微芯片（）,寡核苷酸阵列（）。是一种将核酸分子杂交原理与微电子技术相结合而形成的高新生物技术。将靶标样品核酸或探针中的任一方按阵列形式固定在固相载体（硅片、尼龙膜、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、玻璃片等）上，另一方用荧光分子标记后，加样至微阵列上杂交，然后用荧光扫描或摄像技术记录，通过计算机软件分析处理，获得样品中大量的基因序列和表达信息。

10.基因敲除：基因敲除（），又称基因打靶（）,是指用外源的与受体细胞基因组中顺序相同或非常相近的基因发生同源重组，整合至受体细胞基因组中并得以表达的一种外源导入技术。对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因敲除，或用其他顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动（植）物，推测相应基因的功能。

11.同源建模：是一种蛋白质结构预测方法，具体指是利用同同源蛋白质结构为模板来预测未知蛋白质的结构。同源性大于50％时，结果比较可靠；30～50％之间，其结果需要参考其它蛋白的信息。同源性小于30％时，人们一般采用折叠识别方法。同源性更小时，从无到有法更有效。

蛋白质一级结构：蛋白质氨基酸序列为蛋白质的一级结构。

简答题

蛋白质组学主要包括那些分析技术与各自特点

蛋白质组学分析主要包括：样品的制备、蛋白质的分离纯化、蛋白质结构的测定、蛋白质的互作

=1\*2\*⑴样品的制备：主要包括超声波破碎、液氮冷冻破碎、细胞研磨。酶解法等。

=2\*2\*⑵蛋白质的分离与纯化：根据分子大小不同的纯化方法：透析、超滤、密度梯度离心、凝胶过滤；利用溶解度差别的纯化方法：等电点沉淀；盐溶和盐析；有机溶剂分级分离法；依据蛋白质的电荷：电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳、等电聚焦、层析聚焦、离子交换层析；吸附性质：羟磷灰石层析、疏水层析；对配体的特异亲和力：亲和层析

=3\*2\*⑶蛋白