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川芎嗪对胃癌细胞及血管内皮细胞增殖的影响
川芎嗪对胃癌细胞及血管内皮细胞增殖的影响【摘要】目的研究川芎嗪对SGC7901胃腺癌细胞及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。
方法将不同浓度川芎嗪分别加入体外培养的胃癌细胞,在无因子培养基和在条件培养基中培养的HUVEC中,用MTT法检测细胞增殖情况。
结果川芎嗪浓度为25~625g/mL时,对SGC7901胃腺癌细胞和无因子基培养的HUVEC增殖均无影响(P>0.05);川芎嗪浓度为125g/mL作用48、72h、浓度为625g/mL作用24、48、72h对条件培养基诱导的HUVEC增殖有明显影响(P<0.05),增殖抑制率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而升高。
结论川芎嗪对胃腺癌细胞和血管内皮细胞无直接杀伤作用,但对条件培养基诱导的HUVEC增殖具有抑制作用。
【关键词】胃腺癌;血管内皮细胞;川芎嗪;生长抑制剂胃癌是一种常见的对人类危害较大的疾病,我国在20世纪90年代进行的全国恶性肿瘤死亡率调查表明,胃癌死亡率高居恶性肿瘤死亡率的首位[1],目前使用手术、化疗、放疗等治疗方法存在许多局限,而且不能有效防治胃癌的转移和复发。
川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)是从活血化瘀中药川芎中分离得到的一种生物碱,主要应用于缺血性心、脑血管疾病,毒副作用少。
有研究发现[2],川芎嗪对MKN45人胃癌低分化腺癌细胞有直接的杀伤作用;张薇等[3]的研究则显示川芎嗪能抑制胃癌前病变大鼠新生血管生成,可能对胃癌具有一定的预防和治疗作用。
本文拟通过MTT比色法观察川芎嗪对胃癌细胞和血管内皮细胞增殖的影响,初步探讨川芎嗪在胃癌治疗中的作用和意义。
1材料与方法1.1材料RMPI1640培养基(美国Gibco),SFM培养基(美国Gibco),胎牛血清(FBS,杭州四季青),谷氨酰胺(美国Amresco,博理分装),重组人内皮细胞生长因子(rhECGF,美国Ramp;D),F8兔抗人多克隆抗体、FITC羊抗兔IgG(武汉博士德),盐酸川芎嗪注射液(常州制药厂有限公司,规格:
40mg/2mL,批号:
0403231),MTT(美国Amersco,博理分装)。
1.2方法1.2.1胃癌细胞培养SGC7901胃腺癌细胞(购自中国科学院上海细胞库),用RMPI1640完全培养基(加入10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺)培养。
1.2.2HUVEC培养采用胰蛋白酶消化法分离获取[45]。
用内皮细胞培养基(含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1ng/mLrhECGF的SFM培养基)培养,传代后用第八因子相关抗原免疫荧光染色法进行鉴定。
HUVEC第3~6代用于实验。
1.2.3川芎嗪对细胞增殖影响的检测1.2.3.1对胃腺癌细胞增殖的影响SGC7901胃腺癌细胞以1104个/mL的密度接种于96孔板内,每孔接种100L,用RMPI1640完全培养基(含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺)培养。
培养24h后,吸弃孔中培养基。
每块培养板分4组,每组6个复孔。
正常对照组加入100L/孔RMPI1640完全培养基;川芎嗪组则将含川芎嗪25g/mL,125g/mL,625g/mL的RMPI1640培养基依次加入相应的孔中,每孔100L。
药物作用第24、48、72h取出一块培养板,MTT法检测细胞增殖情况(检测490nm处光吸收值)。
1.2.3.2对无因子培养HUVEC细胞增殖的影响HUVEC以2104个/mL的密度接种于96孔板内,每孔接种100L,用SFM完全培养基(含10%胎牛血清和2mM谷氨酰胺)培养。
培养24h后,吸弃孔中培养基。
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