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蛋白激酶C在大鼠重症急性胰腺炎中表达

1蛋白激酶C在大鼠重症急性胰腺炎中表达作者：

王斌生,曹农,柴琛,俞永江,武光【摘要】目的:探讨蛋白激酶C(PKC)家族成员PKC和PKC在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺及肺脏中的动态表达情况和组织病理改变的关系.方法：

胰胆管逆行注射牛黄胆酸钠制成大鼠SAP模型，观察胰腺及肺脏病理学变化，采用免疫组织化学方法分别检测PKC，PKC在SAP大鼠胰腺和肺脏中的表达情况,并进行对比分析.采用逆转录多聚酶链反应（RRPCR）检测96只大鼠胰腺组织中PKCmRNA的表达情况.结果：

建模后1，6，12和24h假手术（SO）组胰腺中PKC表达分别为0.700.04，0.710.05，0.750.04和0.710.07；SAP组分别为0.830.05,0.950.09,1.100.10和1.080.16，两组各时间点之间差异均有统计学意义（Plt;0.01）.轻型急性胰腺炎（MAP）组大鼠建模后胰腺中PKC表达分别为0.730.04,0.730.03,0.850.08和0.840.06，与SO组各时间点相比，在12h和24h差异具有统计学意义（Plt;0.05），与PKC相类似，PKC的表达在1h开始增高，12h达到高峰，且维持时间较长.MAP组PKC在12h达到高峰，但维持时2间较短，24h时有所减低.结论：

PKC在SAP的病程发展中起重要作用.监测PKC水平可为SAP的早期诊断提供帮助.【关键词】胰腺炎;信号传导;蛋白激酶C;逆转录聚合酶链反应0引言近年来,重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis,SAP)的研究多集中在炎症因子通过信号传导引发全身炎性反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS),并渐进发展成为多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrame,MODS)上，但对于SAP的早期诊断仍缺乏特异性指标.已有研究［1-2］证实蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)可调控多种促炎因子（II1,II12,RNI和NINN等）的活化，测定血清II12水平能预测SAP的预后，对其早期诊断具有重要意义［3］.我们采用免疫组织化学法和RRPCR法测定PKC在SAP中的表达水平，以探讨PKC在SAP中的作用机制，为临床诊治SAP提供依据.1材料和方法1.1材料清洁级SD大鼠96只（雌雄各半），体质量220～260g，（甘肃省中医学院实验动物中心），实验前12h禁食，自由饮水.牛黄胆酸钠(美国Sigma公司)；一步法总3RNA提取试剂Rrizol(美国Invitrogen公司)；一步法反转录聚合酶链式反应(RRPCR)试剂盒（大连宝生物公司）；即用型SANC免疫组化染色试剂盒，兔抗PKC，鼠抗PKC和DAN显色试剂盒(武汉博士德公司).1.2方法1.2.1实验分组96只SD大鼠随机分为假手术(shamoperation，SO)组、轻型急性胰腺炎（mildacutepancreatitis，MAP）组和SAP组，每组动物32只.1.2.2模型制作MAP组大鼠术前禁食12h，自由饮水,戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉,无菌条件下上腹正中切口进腹,于十二指肠内侧见片状分布的胰腺,肝门部胆胰管用无损伤动脉夹夹闭,从胆胰管开口十二指肠系膜缘对侧肠壁穿刺插入导管,导管进入肠腔后对准膨大壶腹中心插入胆胰管约1cm,用微量泵以0.1mI/min速度推注20mI/I牛磺胆酸钠1mI/kg,推注完毕后无损伤动脉夹夹闭胰胆管壶腹部观察10min后拔管,去除动脉夹,缝合十二指肠穿刺口并关腹.SAP组用微量泵以0.1mI/min速度推注50mI/I牛磺胆酸钠1mI/kg,其余步骤同MAP组.SO组开腹仅轻轻翻动胰腺，关腹后皮下注射40mI/kg生理盐水.1.2.3取材和评分各组动物在建模后于1，6，12和24h四个时间点，（各时间点8只动物）以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，经原切口入腹，无菌条件下取胰腺和肺