EHS-M-W-002.0生活饮用水中大肠菌群检测细则(多管发酵法)W.pdfVIP

1适用范围及标准

1.1适用于生活饮用水、水源水、游泳池水中大肠菌群的测定。

1.2技术标准

GB/T5749-2006《生活饮用水卫生标准》

GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》

DB31/890-2015《公共游泳场所卫生管理规范》

2检测原理

2.1总大肠菌群指一群在37℃、24h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧

的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.2耐热大肠菌群指一群在44.5℃仍能生长且发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧

的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.3大肠埃希氏菌是指一群能生长发酵乳糖产酸、产气且在含有荧光底物的培养基上

44.5℃培养24h产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫

外光下产生特征性荧光的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

3仪器和设备

3.1高压蒸汽灭菌器

3.2冰箱：2℃—8℃

3.3恒温培养箱：36℃±1℃

3.4天平

3.5PH试纸

3.6恒温水槽：44.5℃

3.7生物安全柜

3.8紫外光灯：6W、波长366nm

3.9平皿：直径为9cm

3.10试管

3.11刻度吸管

3.12小倒管

3.13金属接种环

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4培养基和试剂

4.1乳糖蛋白胨培养基：称取乳糖蛋白胨于蒸馏水中加热溶解，充分混匀，分装到带

有倒管的试管中(每管10mL)，115℃高压灭菌20min。（注：双料乳糖蛋白胨

即蒸馏水不变，乳糖蛋白胨的成分量加双份。）

4.2伊红美兰琼脂平板：称取伊红美兰琼脂，加热溶解，倾注灭菌平皿，每皿约15ml。

冷凝后，倒置4℃冰箱保存，待用。

4.3革兰氏染色液（染色方法见试剂使用说明书）

4.4EC培养基：称取EC培养基干粉，加热溶解，调PH为6.9±0.2，分装到带有

倒管的试管中(每管10ml)，121℃高压灭菌20min，备用。

4.510%（m/m）硫代硫酸钠溶液：121℃高压灭菌20min。

4.6乳糖胆盐发酵培养管：称取乳糖胆盐，加热溶解，调PH至7.4，分装到带有倒管

的试管中(每管5mL),115℃高压灭菌15min。（注：双料乳糖胆盐发酵管即蒸馏

水不变，乳糖胆盐加双份。）

4.7EC-MUG管：称取本培养基干粉，加热溶解，在366nm紫外光下检查无自发荧光

后分装于试管中，115℃高压灭菌20min，最终PH为6.9±0.2。

5操作步骤

5.1总大肠菌群

5.1.15管法：无菌吸取10ml水样加入双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样加入

单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样加入9ml生理盐水中混匀作10倍稀释后取1

ml(即0.1ml水样)加入单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。对已处理过的

出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接接种五管双料培养基，每管接种

10ml水样。

5.1.215管法：检验水源水时，如污染严重的水样，应加大稀释倍数，可接种1，0.1，

0.01ml甚至0.1，0.01，0.001ml，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种

1ml以下水样时，必须作10倍稀释后取1ml接种。

5.1.3轻摇试管，使液体充分混匀，置36℃±1℃培养箱中培养24h。

5.1.4观察每管是否产酸、产气，如不产酸也不产气则报告为大肠菌群阴性；若液体

变黄且有气体产生则为试验阳性，需做进一步的证实试验。

5.1.5平板分离：自试验阳性管中取一接种环培养液，接