常染色体隐性遗传多囊肾病PKHD1基因检测-论文.pdf

496ChineseJournalofWomanandChildHealthResearch，2013，Vo1．24No．4

1．2．2PCR引物扩增

3讨论

@PCR扩增引物设计：针对PKHD1最长开放阅读框架

67个外显子设计引物序列，扩增产物包括外显子、内含子与外3．1多囊肾疾病的类型

显子剪接位点及部分内含子碱基序列，由于外显子32、58、6l多囊性肾疾病(Polycystickidneydiseases，PKD)是一类

序列过长，需要设计多对引物。扩增PKHD1全部外显子的引以肾脏多发囊肿为主要表现的遗传性疾病，包括3种类型：

物共76对(引物序列见参考文献)；@PCR反应体系：Takara①常染色体显性遗传性PKD(autosomaldominantpolycystic

公司提供的PCR试剂盒共计50txL，其中含DNA模板21xL(浓kidneydiseases，ADPKD)ADPKD是一种涉及多系统、多脏器

度200ng／IxL)，上下游引物各1(浓度20mmol／L)，dNTP41xL的全身性疾病，如腹部肿块、背部和腰部疼痛、贫血、高血压、

(浓度各2．5mmol／L)，TaqDNA聚合酶0．51xL(浓度5U／IxL)，肾功能不全等肾脏表现及肾外表现：肝囊肿、肝动脉瘤等，大

10×PCR缓冲液5tzL，镁离子2．Ommol／L。③PCR扩增条件：多数ADPKD在成年期发病，平均发病年龄在40岁，但约2％

95℃预变性5min后，94变性30s，52～印℃退火30s，72~C延的ADPKD在胎儿期发病，其致病基因为PKD1，PKD2和

伸50s(循环30～35次)，最后一次72℃延伸10min。PKD3，其中PKD1位于16p13．1，PKD2位于4q21一q23，PKD3

1．2．3PCR产物纯化及测序的定位尚不明确；②多发于婴儿的常染色体隐性遗传性PKD

PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下切取目(autosomalrecessivepolycystickidneydiseases，ARPKD)

的DNA条带，用Promega公司提供的WizardTMPCR产物纯ARPKD主要临床表现为双’肾形成多个进行性增大的囊肿，并

化试剂盒纯化回收。纯化后的PCR产物送北京奥科生物工伴有不同程度的肝囊肿和肝硬化、胆管扩张以及先天性的肝

程公司进行直接测序。最后采用PolyPhred软件对测序结果门静脉纤维化，PKHD1基因是目前发现的该疾病的唯一致病

进行分析，根据测序结果识别基因突变位点和突变内容。基因；③致死性的Meckel综合征Meckel综合征主要涉及神

经方面及手指缺陷。本例引产胎儿于孕24周即发现羊水过

2结果

少，B超显示双侧肾脏增大，其内有大小不等囊腔，父母否认

基因检测发现该引产胎儿PKHD1基因第7号外显子下有多囊肾家族史，胎儿未见有手指畸形等外观畸形等异常，故

游第51碱基处7号内含子发生序列变异ISV7+51GT(见我们考虑该病例诊断为ARPKD。

图2)；第l7号外显子多态性位点e．1587TC(P．N529N)(见3．2常染色体隐性遗传多囊性肾疾病导致的羊水过少与

图3)；第32号外显子C．3785CT(P．A1262V)突变，使编码II~JL预后的关系

PKHD1蛋白多肽链第1262号氨基酸由丙氨酸变为缬氨酸ARPKD是由于。肾组织发生时集合管扩张和形成集合管