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ELISA试验技术要点--第1页
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-LinkedImmunoabsorbentAssay,ELISA)
一、基本原理:
利用标记技术将酶标记到抗体(抗原)上,使待检物中相应的抗原(抗体)与酶标记抗
体(抗原)发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时,酶能高效、专一催化、分解底物,生
成有颜色的产物。根据颜色的深、浅,可以判断待检物中有无特异的抗原(抗体)以及量的
大小。该方法可对待测样品进行定性和定量分析,同时具有微量、特异、高效、经济、简便
等优点,因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。
目前使用的酶联免疫检测方法很多,应用较多的有:
间接法——用于测定抗体
双抗体夹心法——主要用于测定大分子抗原
竞争抑制法——主要用于测定小分子抗原
二、试验材料及试剂
酶标板(聚苯乙烯微量96孔板)
包被液(0.05MpH9.6碳酸盐冲液)
无水NaCO1.59g
23
NaHCO32.93g
蒸馏水定容至1000ml
洗涤液(0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液)
NaCl8.0g
KCL0.2g
KHPO0.2g
24
NaHPO•12HO2.9g
242
吐温-200.5ml
蒸馏水加至1000ml
封闭液
明胶1g
包被液100ml
抗体稀释液
明胶0.1g
洗涤液100ml
ELISA试验技术要点--第1页
ELISA试验技术要点--第2页
底物缓冲液(pH5.0柠檬酸-磷酸缓冲液)
0.1M柠檬酸(19.2g/L)24.3ml
0.2MNaHPO(28.4g/L)25.7ml
24
蒸馏水50ml
TMB底物使用液
0
TMB储存液(100mg溶于10mlDMSO,4C保存)0.1ml
底物缓冲液10ml
30%HO10ul
22
现用现配
终止液(2MHSO)
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