精液的透射电镜制样方法.docVIP

精子属游离细胞,故较分散,不易行常规电镜

制样处理,且精液中含有较多的精浆成分,会影响

电镜观察,所以在精液透射电镜样品制备时,必须

对其进行特殊处理。

1材料和方法

取临床病人精液,约1ml左右,置清洁干燥的

盘尼西林小瓶中,放37?温箱约40min液化后,移

至离心管中,并加入约2倍于精液体积的019%生

理盐水或01067mol/L磷酸缓冲液,用吸管上下抽动将其混匀。然后采用低转速、短时间离心图1较完整精子,可见精子头、颈、尾部×10000

()1500r/min,5min。再弃上清。共重复3次离

心。

离心完毕后,将离心管中上清液弃去,加入

(311%戊二醛1,2mlpH712,714,01067mol/L

)()磷酸缓冲液配制,置冰箱4?,固定保存。固定

()2h后,用适当的工具可自制将离心团块轻轻挑

3取出来,规整修块成约1mm方块,然后将其移至

(标本瓶中,再用01067mol/L缓冲液pH712,

)714,加蔗糖清洗3遍,置4?过夜。以后步骤按1透射电镜常规制样技术操作。即经1%OO后固S4

定、乙醇或丙酮梯度脱水、Epon812包埋聚合、超图2精子头部,可见精子顶体及其内外膜及腔隙×20000薄切片、铀铅双染色,最后电镜观察。

之离心时转速较低,时间也较短,故人为损伤较小,2观察结果

()各种细胞器的保存较完好病理因素应排除在外。通过以上方法观察到的精子超微结构如图1,4图示可见精子顶体的内膜和外膜以及二者之间的腔所示。由于采用了近似生理环境的体外处理,加隙,轴丝的9组双管和中央的两条微管,以及大量

参考文献生的学习,改进讲课方法,认真备课以每一手术为1陈光华1联想推理法用于临床护理教学1护理学杂志,1出发点,应用联想推理法教导学生,使他们的()1996;11:56,57知识由薄?厚?薄,强调掌握基础知识的前提下,1997205205收稿]

强化实践操作。

电镜观察提供了多方面的观察之内容。

3讨论

以上结果证明,本方法制备的精子样品,在超

微结构保存上还是比较优越的,且操作也较简单可2靠,比琼脂预包埋等方法要方便。另外由于采

用了多次清洗离心将精浆去除,所以,样品观察中

其背景较干净,非常有利于观察分析。

在进行上述方法制备电镜样品时,有以下体会

?因精子对固定液的渗透压特别敏感,所以要严格控制固定液的及缓冲液的浓度和离子强度。?离心3精子细胞,周围可见精子各段的横断面×7500图时转速不宜过高,时间也不宜过长。?脱水包埋换

液时,要沿管壁缓缓的加入液,注意不要打散离心

团块。?离心次数不应少于3次,以防精浆成分去

除不充分而影响观察。?挑取及夹取样品团块时,

动作一定要轻柔、防止破碎。?因是人为离心成

块,故细胞间无天然联系且较散,所以在切片时,

块不宜修的过大,并要适当改变切速,刀角和厚

度。

参考文献应国华主编1医学生物学电镜技术与细胞超微结构1香1港:香港现代出版社,1993:30,55图4精子轴丝的9+2结构及中段的线粒体鞘×12000

洪涛主编1生物医学超微结构与电子显微镜技术1第22线粒体围绕外周致密纤维形成的螺旋排列的线粒体版,北京:中国科学院科学出版社,1984:124,126鞘都清晰可见。再者由于离心时是一种自然随机沉1997208220收稿]

降,所以精子的各部分各段基本上都可见

到,且有的呈横切面,有的呈纵切面,这样就为

胃癌术前X线内镜联合检查的评价

1212()李秀莲张伟山西省第二监狱医院内科临汾041000临汾市第二人民医院消化科

摘要胃镜和X线消化道造影联合检查,可提高确诊率和对早期胃癌的发现,为手术提供更可靠的依据。结果表明,28例

中早期胃癌2例,进展期26例,经手术病理证实,单纯X线检查漏诊3例,单纯胃镜检查漏诊1例,而两者