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如何提高FuGENEHD转染实验成功率

FuGENE,转染

摘要：在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响，并且合理

的给予您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。

在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响，并且合理的给予

您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。

【组织培养试剂】

一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用

试剂的变更。

基础培养基—目前所使用的各种市售培养基（如，RPMI1640和DMEM）。培养基的成分

包括营养物质（氨基酸，葡萄糖），维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，

因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一

些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。

酚红试剂可保护细胞免受一些HEPES降解所产生的毒性效应，但在使用未加酚红试剂的培养

基的应用场合下，如荧光素酶的测定，细胞毒性则仍然是一个问题。

胎牛血清—血清是一种含有白蛋白、球蛋白、生长促进因子和生长抑制因子的极为复杂的混

和物。采集血清所用动物的年龄、营养水平、和健康状况可影响到血清中这些成分的数量和

质量。因此血清易受显著生物学变异的影响。

添加剂—某些细胞的生长依赖于一些对生命力或细胞分裂必不可少的物质（如，生长因子，

微量元素，必需代谢物和蛋白等）。

CO2培养箱—细胞生长所需环境为37℃、相对湿度为95％的CO2培养箱。用CO2是为了

控制pH值。细胞生理对pH的变化非常敏感，因此多数细胞培养基都含有碳酸氢盐缓冲体系。

有些培养基需要CO2浓度为5％来有效控制pH值，而另一些则需要10％的CO2。需要向

您的培养基供应者核对一下适当的CO2浓度。如果培养箱内培养条件与所需条件不一致（温

度、湿度和CO2）则会导致实验结果的板间变异性。来自于培养箱内的污染物、化学物质，

或真菌／细胞的污染也都可能影响到细胞生理

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【细胞】

一般提示：密切观察您的细胞；确保它们状态良好。在开始转染细胞之前，先制定一个适当

的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持最佳状态。

增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结果的一致性和质量的最

重要的变量。为帮助解决这些问题，罗氏应用科学部与ATCC（美国菌种保藏中心）进行了合

作。

为保证将被转染细胞的质量，罗氏应用科学部建议使用新近从ATCC获得的细胞系。

分裂细胞相比较非分裂细胞—分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此

对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进行转

染时不应处于生长过度的状态。由于FuGENE6和HD转染试剂对于细胞作用温和，可同时

进行贴壁细胞的种板和转染。

此外，还常用促有丝分裂刺激物（如，病毒转化，生长因子，条件培养基，以及滋养细胞）

来活化原代培养细胞。

贴壁细胞相比较悬浮细胞—在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异显著。天生趋于

悬浮的细胞（如HL60，Jurkat）非常难以转染。相反，天生为贴壁的细胞（如HEK，CHO）

则可适应悬浮生长的条件。

这两种细胞（即那些天然悬浮的和那些适应悬浮的细胞）的浆膜是不一样的。据推测转染过

程中的一个限制步骤就是通过内吞作用摄取转染分子（DNA或RNA与转染试剂的复合物）；

然而，目前对此尚未有分子水