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低频脉冲电磁场对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖活性和NO分泌的影响
低频脉冲电磁场对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖活性和NO分泌的影响作者:
马彦卓,许旭东,韩凯,李飞,曹艳杰,张荣庆,王海昌DLclass=page_txtSTRONG【摘要】/STRONG目的:
观察不同作用时间下低频脉冲电磁场对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)增殖活性和NO分泌的影响.方法:
密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞,培养4d后收集贴壁细胞,每日给予低频脉冲电磁场干预,磁场强度0.6mT,频率15Hz.按作用时间的不同分为对照组(0h)和磁场作用时间组(0.5,2,4,8h组),各组细胞培养及磁场干预3d后,分别采用MTT比色法测定EPCs的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,Griess法检测培养上清中NO水平.结果:
对照组A490nm为(0.370.07),0.5h组(0.370.06),2h组(0.400.09)与对照组(0.370.07)相比差异无统计学意义(Pgt;0.05);4h组A490nm值开始增加[(0.450.03)vs(0.370.07);P0.05],8h组较对照组增加最为明显[(0.490.08)vs(0.370.07);P0.01].0.5h组,2h组细胞增殖指数PI(S+G2M)%与对照组相比差异无统计学意义(Pgt;0.05),4h组,8h组细胞增殖指数与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05).NO分泌随磁场作用时间的延长,其分泌增加.结论:
低频脉冲电磁场可影响EPCs的增殖及NO分泌,随着作用时间的延长,细胞增殖及NO分泌增加.STRONG【关键词】/STRONG电磁场;内皮祖细胞;细胞增殖;一氧化氮STRONG0引言/STRONG内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)作为Medicine治疗性血管形成的研究靶点,已发现其不仅参与血管形成,也参与出生后血管生成[1].低频脉冲电磁场作为一种外来干预手段,已发现其可促进内皮细胞修复,促进内皮细胞FGF的分泌,提示低频电磁场对血管形成具有促进作用[2].我们采用体外培养大鼠骨髓EPCs,观察低频脉冲电磁场不同作用时间下骨髓EPCs增殖能力和NO分泌的变化及其时效关系,并探讨其相关作用机制,以期寻找一种新的促进血管生成的手段.STRONG1材料和方法/STRONG1.1材料健康雄性SD大鼠30只,体质量80~100g(第四军医大学实验动物中心);脉冲电磁场发生仪(第四军医大学生物医学工程系);Ficoll淋巴细胞分离液(中国医学科学院生物工程医学研究所);胎牛血清(美国Hyclone公司);血管内皮生长因子(VEGF),成纤维细胞生长因子(bFGF)(澳大利亚CYTOLAB公司);FITC标记荆豆凝集素Ⅰ(FITCUEAI,美国Sigma公司);DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiIacLDL,美国MolecularProbe公司);NO试剂盒(南京建成生物工程研究所);激光共聚焦显微镜(美国BioRad公司).1.2方法1.2.1EPCs的分离、培养与鉴定[2-3]将大鼠颈椎脱臼处死后,取四肢骨用750mL/L乙醇浸泡10min,用5mL注射器抽取培养液冲洗骨髓液,密度梯度离心法获取单个核细胞,将其接种予培养瓶中,在M199培养基(含100mL/LFBS,VEGF10g/L,bFGF5g/L,L谷氨酰胺300mg/L,青霉素1105U/L,链霉素100mg/L,肝素1.25104U/L)中培养,差异贴壁法培养4h后,吸取上清置于新的培养瓶中继续培养4d.将培养4d的细胞消化,接种于盖玻片上,24h后将细胞爬片行DilacLDL与FITCUEAI直接免疫荧光双染.向细胞爬片孔内加10mg/LDilacLDL,37℃孵育10h后,细胞爬片经40g/L多聚甲醛室温固定10min,PBS漂洗后加入10mg/LFITCUEAI并于37℃避光孵
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