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菌落总数检验操作规程

目的：该操作规程用于规范公司产品及原料的活菌数量检验操作。

范围：该操作规程适用于公司要求检查该项的产品和原料的菌落总数检验

责任人：微生物检验员，QC主管

内容：

1技术依据及原理

菌落总数计数采用平板菌落计数法，这是活菌计数方法之一。

该方法以在琼脂平板上，样品经过处理在一定条件下培养后，所得1ml（或1g）检

样中形成菌落的总数。测定结果只反映在规定条件下，只包括一群在平板计数琼脂生长

发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。

在进行本法测定时，必须严格按本法规定的条件操作，以免产生实验误差。

2材料、仪器、试剂的准备及基本要求

2.1无菌室

2

2.1.1结构和要求无菌室面积不超过10m，高度不超过2.4m，应采光良好、避

免潮湿、远离厕所所及污染区，有缓冲间（2个）、操作间组成。

操作间与缓冲间之间应有样品传递窗（箱），出入操作间和缓冲间的门不应直对。

无菌室应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹

弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不得安装下水道。

无菌室照明灯应嵌装在天花板内，室内光照分布均匀，光照度不低于300勒克斯。

3

缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m）,紫外线杀菌灯距实验台面高度

-2

不超过1m，并定期检查其辐射强度，辐射强度不低于70µW·cm

（1m距离），不符合要求的紫外线杀菌灯应即使更换。

2.1.2温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外线杀菌灯的杀菌效果，

故应控制温度18～26℃，相对湿度40～60%。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对

环境形成正压，压差不低于4.9Pa。

2.1.3操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度应不低于10000级，

局部净化度100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙

醇灯、打火机、大小橡皮乳头等。

2.1.4缓冲间缓冲间应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不应

放置培养箱和其他杂物。

2.1.5洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌落或沉降菌数测定法。

洁净级别≥0.5µm尘埃数/m3空气≥05µm尘埃数/m3空气活微生物数（个）/m3

100级≤3500≤0≤5

10000级≤350000≤2000≤100

沉降菌数测定

无菌室操台消毒擦拭处理后，先启动层流净化装置30分钟，将备妥的营养琼脂平

板3个（经30～35℃预培养48小时，证明无菌落生长）。以无菌方式（或经传递箱）移

入操作间，置净化台左、中、右各一个，开盖，暴露30分钟后将盖盖上。在30～35℃

培养箱倒置培养48小时，取出检查，3个平板平均菌落数不超过1个。

无菌操作台或净化操作台要定期检测其洁净度，应达到100级，净化工作台中的高

效及中效过滤器应根据检测情况，必要时予以更换处理。

洁净级别￠90㎜、0.5h

100级≤1

10000级≤3

100000级≤10

2.1.6消毒处理无菌室应在每次操作前、后均用0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒

液擦拭操作台及可能污染的死角。开动净化装置，同时用紫外灯杀菌照射30分钟。

2.2其他设备净化工作台；恒温培养箱36℃±1℃、30℃±1℃；冰箱2℃～5℃、

恒温水浴箱46℃±1℃；匀桨仪（8000～10000r/