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当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子表达的影响
当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子表达的影响【摘要】目的研究当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。
方法将孕期14d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组。
缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天一次经尾静脉注射生理盐水8ml/kg(连续7d),后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2h(连续3d:
孕期第14,15,16天);当归治疗组用250g/L的当归注射液代替生理盐水,其余处理同缺氧组;对照组不缺氧,其余同缺氧组。
3组孕鼠分娩当日取肾组织、多聚甲醛固定,石蜡包埋切片、VEGF免疫组化、400倍拍照、IPP6.0软件图像分析。
结果缺氧组新生鼠VEGF阳性细胞的数量和积分光密度值均较对照组增大(P<0.05),当归组VEGF阳性细胞数量和积分光密度值均较缺氧组减小(P<0.05)。
结论一定时间、一定氧浓度的宫内缺氧可刺激新生大鼠肾脏VEGF的表达增加;而当归注射液可使VEGF的表达下降。
【关键词】当归;缺氧;肾;血管内皮细胞生长因子血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是调节血管发生的基本生长因子,在肾脏中含量丰富,已有较多证据表明VEGF在肾脏胚胎发育中起重要作用。
宫内缺氧是影响胚胎发育的常见因素,而肾脏是对缺血缺氧最敏感的器官之一,VEGF是调节血管发生的基本生长因子,它可以与内皮细胞上的受体相结合,从而促进内皮细胞的增殖,加速新生血管的生成。
许多组织器官在低氧环境下,都可诱导血管内皮细胞生长因子VEGF的表达,使毛细血管代偿增生,缓解缺氧状态。
近年来也有报道VEGF与肾脏的生理和一些病理状态相关。
本实验试图通过建立宫内缺氧模型,观察在体状态下缺氧对新生大鼠肾脏VEGF表达的影响,探讨VEGF与肾脏缺氧的关系,并观察中药当归对肾脏缺氧状态的调节作用。
1材料鼠抗VEGF(中杉金桥生物技术有限公司)、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒(棕黄色)购自武汉博士德生物工程公司;250g/L的当归注射液购自武汉大学附属第二医院药剂科(批号060926)。
OLYMPUSBx-70荧光显微镜成像系统为日本OLYMPUS光学仪器有限公司生产;德国莱卡切片机;三气培养箱(购自美国REVCO公司)。
SD大鼠15只(220~250g)由泸州医学院动物实验中心提供。
2方法2.1动物配种与分组成年健康SD雌大鼠15只(体质量220~260g),分别与SD雄鼠合笼配种,次日晨见阴栓记为大鼠怀孕0d,孕鼠随机分为对照组、缺氧组、当归组各5只。
2.2宫内缺氧模型建立参照余鸿[1]等制作的宫内缺氧模型。
当归组孕鼠自孕14d开始,每天下午2:
00经尾静脉注射250g/L的当归注射液8ml/kg(孕第14~20天,连续7d),1h后放入设置好的三气培养箱(氧体积分数130ml/L,温度25℃,二氧化碳体积分数0.4~0.6ml/L)内缺氧2h,连续缺氧3d(孕第14~16天),第17,18,19,20天仍给予当归注射,但不缺氧。
缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组。
对照组不缺氧,余同缺氧组。
2.3取材、石蜡切片及VEGF免疫组织化学测定每组随机选取15个新生鼠肾脏,然后进行常规石蜡包埋,经肾脏冠状切面切片(片厚4m),每组切片脱蜡至水,各组随机取12张切片分别作VEGF(1∶200)免疫组化染色(常规链酶亲和素一生物素一过氧化物酶复合物法)。
其余切片做HE染色,免疫组化切片在400倍显微镜下观察肾脏皮质,每张切片随机选取5个视野,每个视野随机选取3~5个近曲小管。
采用OLYMPUSBx-70荧光显微镜成像系统拍照,经Image-ProPlus5.1图像分析系统对阳性细胞进行图像分析。
2.4统计学处理各组间比较
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