戚豫1遗传病的实验室检查手段超级简化版.ppt

戚豫1遗传病的实验室检查手段超级简化版;2007,Illumina推出Solexa;ABI推出SOLid…均能在3天内完成1人的全基因组测序;遗传病和基因的数量？;“遗传病”概念;发病频率——总计占我国出生人口5.6%；为全球平均5～7倍;先天性疾病的诱发因素;如何检出？;实验室检测手段,分辨率,和范围;从核型;FISH;arrayCGH;MLPA;

到CMA(chromosomalmicroarrayanalysis,染色体微阵列,分子核型)——细胞遗传学与分子遗传学相结合的方法;1、染色体核型Karyotyping

——基于显微镜下浓聚的染色体形态;2、荧光原位杂交技术FISH(fluorescenceinsituhybridization,);;3、多重探针连接扩增MLPA(multiplexligation-dependentprobeamplification)

SchoutenJP第一次描述一种基于PCR反应，通过毛细管电泳鉴定扩增产物是一种高分辨的，用于检测基因组序列拷贝数变异的方法(NucleicAcidsRes.2002Jun15;30(12):e57)

;同时检测40个基因组序列异常，几乎每个染色体2个

近端粒常有微缺失涉及不育、发育、智力，可一次查全

仅需要20ng的DNA

能检测单个外显子exon的拷贝数,

探针辨认短的基因组序列,部分变性的DNA,如石蜡包埋,甲醛固定的样本均可使用

相对定量40个mRNA,鉴定启动子的甲基化状态,检测已知的突变和SNPS;M

L

P

A

反应过程;MLPA结果判定;2024/8/30;2024/8/30;MLPA

需要条件;4、比较基因组杂交(Comparativegenomichybridization,CGH);Microarray

BACs/PACs

DNA探针固定在玻璃片上

Arrayedbyrobotically

printingDNAontoslides

Agilentscanner

;Patient2

ThispatientpresentedtotheLaboratoryat12monthsofagewithinfantilespasmsanddevelopmentaldelay.Hisheadcircumferencewasbelowthe2ndcentileandweightwasbetweenthe10to25thcentile.Seizurescontinueddaily.Atareviewat32monthsbrachycephaly,lowanteriorhairline,hypertelorism,andalargeprotrudingtongueweresomeoftheadditionalfeaturesobserved.SubtelomericFISHrevealedadeletionofthedistal9qprobePAC112N13.Array-CGHshowedthepatienthasa1.5-1.8Mbdeletionofdistal9q.FurtherFISHevaluationestablishedthedeletionas1.7MbwithbreakpointsbetweentheBACclonesRP11-83N9andRP11-695L17.;11qduplication;Newarray-CGH?;双色激光扫描

红色CY5

绿色CY3

F值产生;真实扫描芯片图(8X60K芯片);Cytoreport:给出23条染色??图和分析表格（列出部分）;什么是基因诊断？;基因诊断技术基础:PCR;PCR产物检测;不适合做PCR诊断的病种;哪些遗传病可以做基因诊断?

——需要查阅OMIM遗传病数据库();哪些遗传病可以做基因诊断?

——基因诊断适用范围和必要性;例如:家族性氨基甙类药物耳聋;;例2线粒体病的基因诊断;Leigh病-亚急性坏死性脑脊髓病;病例1、临床表现;2024/8/30;2024/8/30;方法

PCR扩增mtDNA8791-9413片段(622bp)

分别用限制性内切酶MspI和SmaI酶解PCR产物

2.5%琼脂糖凝胶电泳分离酶解片段

对EB染色的片段进行密度扫描，突变比例（Mut%）=突变新增片段密度/原有片段残留密度+突变新增片段密度;患者L1以第1对