核酸抽提的一些基础知识解答.pdfVIP

核酸抽提的基础

近期撰写了一个对于核酸抽提的基础现状的底稿；没有去找参照书润饰，所

以会有点纷乱。第一申明的是：这篇东西只为有必定核酸抽提基础知识的人准备，同

时也将会实时改正。那些分子生物学的过客，最好不要看本文；一是我的思想有

点跳跃，二则是没有必需糟践自己的时间。

写这篇东西的此外一个原由是，我向来在思虑怎样简化经典的无介质的核酸抽

提程序。最经典的是裂解一步，去蛋白质一步，核酸积淀一步；DNAzol将这三步并

成了一步，按道理已经简化到了极致。事实是，DNAzol并无被大家认同，其原由大

体仍是质量不太靠谱吧。此刻也有使用ProteinaseK消化后直接积淀核酸的方法，

三步简化成了两步，可我总感觉醇的积淀不行能完全去除ProteinaseK。明年大体

还没有生物学的诺贝尔奖会花落中国的，那么先求得一

个核酸抽提最简单的非介质方法世界当先怎样？一笑！也必定。

1、核酸抽提原理

简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核

酸游离在裂解系统中的过程，纯化则是使核酸与裂解系统中的其余成分，如蛋白

质、盐及其余杂质完全分其他过程。

经典的裂解液几乎都含有去污剂（如SDS、TritonX-100、NP-40、Tween20

等）和盐（如Tris、EDTA、NaCl等）。盐的作用，除了供给一个适合的裂解

环境（如Tris），还包含克制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的损坏（如

EDTA）、保持核酸构造的稳固（如NaCl）等。去污剂则是经过使蛋白质变性，损

坏膜构造及解开与核酸相连结的蛋白质，进而实现核酸游离在裂解系统中。裂解系

统中还可能加入蛋白酶；利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促使核酸与蛋白质

的分开，同时，也便于后边的纯化操作以及获取更纯的核酸。也有直接使用高浓度

的蛋白质变性剂（如GIT、GuHCl等）裂解的，该方法已经成为了RNA抽提的主

流，却不是DNA抽提的主流。

最常用的纯化方法，一是PC抽提+醇积淀，二是介质纯化。第一种方法是

利用PC对裂解系统进行频频抽提以去除蛋白质，实现核酸与蛋白质的分别；再用

醇将核酸积淀下来，实现核酸与盐的分别。第二种方法例是利用某些固项介质，在某

些特定的条件下，选择性地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特色，实现核酸与

蛋白质及盐的分别。高盐积淀去除蛋白质是第一种纯化方法的一个变体，省略了

PC操作的麻烦。自然，也有不纯化的抽提方法，可是用途多限制于简单的PCR。

其余杂质-如多糖、多酚等的去除，基本上都是在这两种方法的基础上，

经过增添一些特其他试剂，或许增添一些额外的步骤来实现的。

2、裂解方法的评论

含蛋白酶的裂解方法，仍旧能够以为是抽提基因组DNA的首选。裂解包含膜

蛋白的游离和与基因组DNA相连结的蛋白质的游离。蛋白酶的作用是使蛋白

质变小，故而对蛋白质的游离有巨大的促使作用；同时，巨大的基因组DNA是

很简单“缠”住大分子的东西的，蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不简单被基因组

DNA“缠”住，有益于蛋白质在纯化操作中的去除，使最后获取的基因组DNA的

纯度更高。此外一个思路是，假如基因组DNA与蛋白质“缠”在一同，在纯化的

过程中有两种可能：假如DNA的特征占优势，则纯化时以DNA的形式被保存下

来，致使蛋白质的残留；假如蛋白质的特征占优势，则纯化时以蛋白质的形式被去

除，致使DNA的损失。此外，象有些样品，如肌肉，即便是RNA抽提，

也激烈建议使用含蛋白酶的裂解液，原由在于这些样品中的蛋白质，是特别难以

去除的。

高浓度蛋白质变性剂（如GIT、GuHCl等）的裂解方法，是抽提RNA的

首选。总RNA的抽提，最重要的是快速裂解细胞膜，至于与基因组