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薄层色谱法;1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书,推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单,分析速度快,分离效率高,结果直观,很快被用作定性和半定量的方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪,和各步操作的仪器化,并实现了计算机化。;2021/12/19;色谱概念;1.2色谱的发展史;几类色谱分离法的比较;色谱的其他分类方法;按操作方式不同;平面色谱分类;薄层色谱法基本原理;7.2薄层色谱法参数;L0;2.相对比移值Rs(relativeRf;Rr);相对比移值(Rr);(二)面效参数(理论塔板数和塔板高度);1.分配系数K(distributioncoefficient)
K=cs/cm
溶质在固定相与流动相浓度比值
2.容量因子
k=CsVs/CmVm=K(Vs/Vm)
固定相中溶质总量与流动相中溶质总量之比;;;相平衡参数;K、k与Rf值的关系推导;(三)相平衡参数;讨论
⑴Rf与K有关,即与组分性质(溶解度)以及薄层板
和展开剂的性质有关,K↑大,Rf↓小
⑵薄层板一定,Rf只与组分性质有关,对于极性组分,
展开剂极性↑大,Rf↑大(容易洗脱)
展开剂极性↓小,Rf↓小(不容易洗脱)
⑶Rf=1K或k=0组分在前沿
Rf=0K或k=∞组分在原点;(四)分离参数;2.分离数(separationnumber;SN);7.3吸附薄层色谱法;1.定义固定相(吸附剂或载体)涂布成一均匀薄层,点样,(密闭的容器中)展开,斑点显色,(与对照物质)比较进行定性定量。;概述;;一、薄层色谱系统;(2)表面改性固定相
疏水改性硅胶——化学键合烷基
亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二羟基等,薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间(极性次序:硅胶﹥氨基﹥氰基﹥二羟基﹥反相)。
表面改性纤维素——乙酰化纤维素
药典收载的固定相有:硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一般要求10–40μm。;2.载板
——玻璃板,放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时,除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净,干燥,置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。
;3.黏结剂
???机黏结剂——石膏(硫酸钙),
“G”表示添加石膏的吸附剂。
“H”表示没有黏结剂的吸附剂。
无机黏结剂的优点是:耐高温,耐酸碱,但涂铺薄板动作要快,否则匀浆易凝固。薄层强度差。
有机黏结剂——羧甲基纤维素钠(CMC)、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便,但不能用浓硫酸作显色剂。;
荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指示剂,常用的荧光指示剂
以“F”表示含有荧光指示剂的商品吸附剂,并以下标注明其激发光波长。例硅胶HF254
在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。
在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。;薄层板涂铺要求:均匀、平整、无气泡引起的凹坑和龟裂。例:
硅胶板(粒度10~40um)
硅胶G——将硅胶置研钵中,加入少量水,研磨均匀,至无结块和气泡,再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水),迅速研磨均匀,立即涂铺。
硅胶或硅胶H——以CMC为黏合剂。配制0.2%~0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀浆。
;4.薄层板活化
涂布后的薄层先在室温下阴干,在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化,然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同,如:
硅胶110℃1h
氧化铝110℃30min;5.点样
样品的溶剂_____高度挥发性和尽可能非极性,否则易使斑点扩展。
多次点加法
点样量适中_____过载会引起斑点拖尾,分离度变差,以最小检测量的几倍~几十倍为宜。
手工点样工具_____定容玻璃毛细管(1–5ul),微量注射器。;自动点样
LimomatIV喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层,移动板台,使在薄层上流下样品条带。
特点:适合于大量稀样品溶液的喷加;条带宽度不超过2mm,有利于改善分辨率;便于狭缝式光密度计扫描;要求薄层板强度高。
自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。
药典规定:点样基线距底边2.0cm,样点直径2-4mm,点间距离约为。;展开:层析缸,预饱和,防止边缘效应
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