血清学实验技术.ppt

补体结合试验包括反应系统(抗原和抗体)、补体和指示系统(被溶血素致敏的红血球)特别烦琐,影响因素多,现很少用CCC反应系统指示系统溶血反应结果判定抗体抗原补体溶血素+红细胞第32页,共36页，星期六，2024年，5月免疫转印技术以标记抗体为探针的蛋白转印杂交基本过程包括待测蛋白样品的电泳分离、蛋白向杂交膜(硝酸纤维素膜)的转移、杂交膜的封闭、用标记抗体进行的杂交、洗涤和信号显示第33页,共36页，星期六，2024年，5月E玫瑰花环试验T细胞膜上有红细胞受体,在一定条件下能与红细胞(erythrocyte)结合,在显微镜下呈现花环样结构,称为E花环(Erosette)根据试验条件的不同,形成的花环有T细胞总花环(Et花环,4℃,2h)、活性E花环(早期E花环,混合后立即形成)和稳定E花环(Es花环,37℃,30分钟)不同动物T细胞结合的红细胞来源不同,如人T细胞与绵羊红细胞可以作为区别和分离T细胞和B细胞的方法之一T红细胞红细胞受体第34页,共36页，星期六，2024年，5月淋巴细胞转化试验原理:体外培养的淋巴细胞受抗原或促有丝分裂原刺激时,可转化为淋巴母细胞,表现为细胞体积增大、合成代谢增强和释放细胞因子,能反映体内细胞免疫功能刺激因子:非特异性刺激因子：植物血凝素(PHA)，刀豆素A(ConA)，美洲商陆(PWM)，PHA最常用特异抗原：结核菌纯化蛋白衍生物PPD，细菌内毒素等方法:形态学方法,3H-TdR掺入法，MTT法第35页,共36页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第36页,共36页，星期六，2024年，5月关于血清学实验技术概述定义：免疫学技术是根据抗原抗体特异性结合原理建立的各种检测、分析技术的总称分类：体外免疫检测技术：常以免疫血清作为抗体的来源，故又称为血清学试验细胞免疫技术：用于检测和研究集体的细胞免疫功能与状态免疫制备技术：如抗体制备、纯化、标记技术等第2页,共36页，星期六，2024年，5月血清学试验类型凝聚性试验：凝集试验，沉淀试验标记抗体技术：荧光、酶、放射性同位素标记技术等有补体参与的试验：补体结合试验等中和试验：病毒中和试验等免疫转印技术免疫传感器技术第3页,共36页，星期六，2024年，5月血清学反应的一般特点特异性与交叉性:抗原抗体结合的特异性是抗原分析和疾病诊断的基础；但不同微生物的部分共同抗原或不同抗原的相同表位可出现交叉反应，后者是区分血清型或亚型重要依据结合比例:抗原抗体结合在比例适当时才出现明显可见反应,抗原或抗体过多可抑制可见反应,称为带现象可逆性:抗原抗体结合力与非共价键性质、数量和距离有关,形成的复合物可以解离,离解常数(K)反映抗体与抗原之间的亲合力,高亲合力结合不易解离反应的阶段性:特异结合迅速(几秒-几分钟),可见反应阶段较长在凝集试验（颗粒性抗原）中，常因抗体过剩出现前带现象，故需固定抗原稀释抗体；而在沉淀试验（可溶性抗原）中，可因抗原过剩出现后带现象，故需稀释抗原第4页,共36页，星期六，2024年，5月影响血清学反应的因素抗体:包括抗体动物来源、浓度(效价)、亲和性等抗原:包括理化特性(可溶性，颗粒性)和抗原表位数目及种类电解质:无电解质存在不出现可见反应(沉淀或凝集),一般用生理盐水作为抗体和抗原稀释液,有时需特殊电解质,但盐浓度过高会出现非特异性蛋白沉淀(盐析)酸碱度:反应一般在pH6-9范围内进行温度:一般在37℃或室温进行,较低温度(如4℃)出现可见反应慢,但特异性强,温度过高会使已结合复合物解离时间:出现可见反应需要一定时间,应在一定时间内观察结果或终止反应第5页,共36页，星期六，2024年，5月血清学试验的优点特异性强，敏感性高检测样品用量少，预处理较简单试验方法多，可择优选用方法简易、快速可用于抗原或抗体的定性、定量、定位检测第6页,共36页，星期六，2024年，5月血清学试验的应用抗原抗体定性检测:疾病诊断血型鉴定病原微生物分型鉴定抗原抗体的定量检测:抗原或抗体效价测定免疫效果跟踪检测流行病学调查其它生物活性物质定量分析抗原定位检测:借助光学和电子显微镜,在细胞和亚细胞水平研究病原微生物及其表达产物与宿主细胞的关系第7页,共36页，星期六，2024年，5月凝聚性试验定义：抗原与相应抗体结合形成复合物，在电解质存在下相互凝聚成肉眼可见的凝聚物或沉淀物分类凝集试验：细菌、红细胞等颗粒性抗原或与颗粒性载体（红细胞、乳胶等）结合的可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质参与下形成肉眼可见的凝集团块沉淀试验：可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质参与下形成