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pET载体
pET载体，原核表达金标准
对于全世界许多研究者，Novagen的
pET系统已成为在大肠杆菌中蛋白表达的首
选。该系统成功的一个主要原因是目标基因被克
隆到不为大肠杆菌RNA聚合酶识别的T7启
动子之下，因此在加入T7RNA聚合酶之前几
乎没有表达发生。克隆到pET载体的基因实际
上是被关闭的，不会由于产生的蛋白对细胞有毒
性而引起质粒不稳定。重组质粒转移到染色体上
含有一拷贝由lacUV5控制的T7RNA聚合
酶基因的表达宿主中，并通过加入IPTG诱导
表达；也可通过lCE6感染原始克隆宿主菌来
提供T7RNA聚合酶。使用大肠杆菌启动子系
统(如tac、lac、trc、pL)有困难的许
多基因已经在pET系统中稳定克隆和表达。
T7RNA聚合酶的选择性和活性使得几乎所有
细胞资源都用于为目标基因表达。诱导后几小时
目标产物就可超过细胞总蛋白的50%。
新开发的T7驱动表达技术以pETBlueTM
系统为代表。pETBlue载体包括了pET用于
表达的优点，在目标基因克隆和质粒DNA操作
的方面更为方便。
pETBlueTM系统：新一代T7表达载体
pETBlue载体代表了新型表达载体，它具备所
有广受欢迎的克隆载体的最理想特点和T7驱
动蛋白表达的完全功能。目标基因以相对于修饰
的大肠杆菌tet启动子的反义方向插到lacZa
-肽编码区，因此可进行蓝/白斑筛选。正确定
位于目标基因正义方向上游的T7转录和翻译
信号使表达成为可能。与标准pET载体一样，
通过转化λDE3溶原菌并用IPTG诱导或通
过lCE6感染原始宿主菌生产目标蛋白。
优点
·蓝/白斑筛选，便于克隆
·高拷贝数，质粒DNA高产
·以AccepTorTM载体或perfectlyBlunta
载体形式提供，便于快速PCR克隆
·目标基因无基础水平表达，消除了毒性基因产
物相关的质粒不稳定性
·表达水平与经典pET载体相同
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