淋球菌分子生物学检验课件.ppt

淋病奈瑟菌的分子生物学检验;目录;淋球菌;淋病奈瑟菌的基因组结构特征;淋病奈瑟菌的基因组结构特征;一、淋病奈瑟菌核酸的检测

1.聚合酶链反应：PCR是分子生物学中最常用检测基因的技术手段，也是淋病奈瑟菌基因诊断中最基本的方法。PCR引物的设计应选择与其相应的靶基因，多采用：

①隐蔽质粒cppB基因

②16srRNA基因

③porA假基因；

④编码外膜蛋白基因(omp基因)

⑤opa基因等；

⑥胞嘧啶DNA甲基转移酶基因。;2.实时荧光定量PCR技术：该技术是目前临床检测NG的主要分子生物学技术。

3.连接酶链反应：用于LCR方法检测的NG靶基因主要有opa基因和pilin基因。该法对于检测咽拭子标本具有很好的敏感性。

4.链替代扩增技术：SDA是一种基于酶促反应的新的DNA体外等温扩增技术。目前使用最多的是BectonDikinson公司产生的ProbeTecET，可以同时对CT和NG进行检测。ProbeTecET特异性扩增NG染色体PviNg基因，然后用荧光标记的探针检测其相应的DNA靶序列，2小时可以完成96份标本检测。与培养法相比具有很高的敏感性和特异性。;③porB基因porB基因可编码淋球菌的孔蛋白(Porin，与细菌侵袭力有关).当发生基因突变时，孔蛋白对亲水性的抗生素渗透性下降，产生耐药。

④Mtr系统调控基因MtrR系统调控基因的突变会导致由它编码的MtrR阻遏蛋白减少消失，Mtr操纵子的转录增强，使MtrCDE基因表达增加，编码的泵蛋白外排活性增强，加大了脂溶性抗生素的排出，使菌体内药物蓄积不足，从而产生耐药性。

⑤erm基因erm基因编码erm酶，如果发生突变，erm基因编码的酶可使rRNA自动甲基化，从而使大环内酯类药物的作用靶位——核糖体50S亚基蛋白改变，使药物与靶位的亲和力下降引起耐药。

;三、分子生物学检测的临床意义

淋病奈瑟菌临床诊断主要依赖于实验室对淋球菌的检测，传统的涂片法简单，廉价，但敏感性低；近年来出现的新分子生物学技术具有较高的特异性和敏感性，大大缩短了检测时间，在淋病的早期诊断中具有重要临床意义：

1.克服了淋球菌培养时间长等缺点，提高了临床样本检测的阳性率和准确性。

2.通过分子生物学技术可以进行淋球菌感染的分子流行病学调查。

3.可以准确，快速评价药物治疗的效果。

4.有利于淋病的鉴别诊断。