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标准菌株使用标准操作规程

1检验目的

对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定

可靠。

2范围

微生物实验室保存的标准菌株。

3职责

微生物组工作人员正确执行本操作规程。

4术语和定义

4.1标准菌株

其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC（AmericanTypeCultureCollection）

美国标准菌株收藏中心。

4.2标准储备菌株

标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。

4.3工作菌株

标准储备菌株传代后得到的同种菌株。

4.4标准培养物

标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。

4.5质控菌株

ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准

菌株。特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。

5保存程序

5.1标准菌株

℃低温保存，可以2年以上。安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。将标准菌株进行

编号和登记。

用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择

适宜的培养条件培养18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。

5.2标准储备菌株

成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于20%的甘油。挑取5环菌落

加入到1ml甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80℃保存。除链球菌和嗜血杆

菌以外细菌均可使用。保存期限1-5年。

成分为脱纤维羊血。挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。

-80℃保存。主要用于保存链球菌、嗜血杆菌及厌氧菌。保存期限1-5年。

5.3工作标准菌株

由标准储备菌株传代得到的菌株。标准储备菌株对多向下传三代。过多的传种会增加

变异的机会。标准储备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行培养18-24h

即工作标准菌株。储存在2-8℃，可放四周。个别营养要求高的为2周，例如肺炎链球菌

和嗜血杆菌。使用时应编号并登记。

5.4编号方法

每个菌的保存管都要有唯一的编号，签字笔标注，便于查找和管理。

来源数字意义

购买的标准菌株1501ATCC2592215年第1株ATCC25922

储备标准菌株1501ATCC25922-3由1501ATCC25922传代而来的3号标准储备菌株

5.5记录管理

5.5.1菌种应有严格的登记。每个编号都要有详细的记录包括来源、传代、保存方法、使

用记录、使用原因、高压灭菌记录等。附表《标准菌株记录表》《标准储备菌株记录表》

5.5.2菌种保管应有专人负责，保存于专用冰箱中，双人双锁，确保菌种安全。保管人员

变动时，必须严格交接手续。

5.5.3各种菌种应按规定时间接种，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更

换

6使用流程

标准菌株购买的标准菌株，编号，-80℃用完第二天高压灭

复苏接种合适的培养基，孵育出菌性能验证

标准储备菌挑取典型的菌落到合适的稳定剂中，编号，-80℃保存，准备n支

日质控周质控月质控

每周取出一支标准传代培养每周取出一支标准每月取出一支标准

储备菌株传种合适储备菌株传种合适储备菌株传种合适

的培养基，适宜条件储备菌株的培养基，适宜条件的培养基，适宜条件

传代培养物可以作为直接作为工作菌株使用，第二天高压灭菌

孵育出菌落管用完第孵育出菌落孵育出菌落