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实验一紫外－可见分光光度计的性能检验

一、实验目的

1.掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法

2.学会UV-1100型紫外－可见分光光度计的使用方法

二、实验原理

分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因此，要对仪器进行性能检查，

以保证测定结果的准确性。

三、仪器和试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度仪

石英比色皿（一对）

擦镜纸

KCrO溶液KMnO溶液

2274

蒸馏水

四、实验内容及操作步骤

1.比色皿的配对性将蒸馏水注入到比色皿中，以其中一个比色皿作空白，在440nm波长处

分别测定其他各比色皿中的透光率。

2.波长精度的检查用KMnO溶液的最大吸收波长525nm为标准，在待测仪器上测绘KMnO溶

44



液的吸收曲线，若测得的最大吸收波长在5251nm以内，则仪器的波长精度符合使用要求。

3.重复性以0.02mol/L的HSO溶液的透光率为100%，用同一KCrO溶液连续测定7次，求

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出极差，如小于0.5%，则重复性符合要求。

4.吸收值的准确度考察取KCrO溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸

227



收系数比较，如下表所示，其相对偏差在1%以内，则吸收值的准确度符合要求。

235257313350

波长/cm

（最小）（最大）（最小）（最大）

吸收系数E1%123.0～126.0142.8~146.247.0~50.3105.5~108.5

1cm

五、思考题

1.同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？

2.检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？

实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定

一、实验目的

1.掌握测绘吸收曲线的方法

2.学会测定吸收系数

二、实验原理

若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、λmin或λ(S)为一定值，且他们的数目也

一定，从而为鉴别化合物提供了有力的证据。

百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。

A

即E1%

1cmC1

三、仪器和试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度计

石英比色皿（一对）

100ml烧杯1个

擦镜纸

95%乙醇（A.R）

丹皮酚对照品

四、实验内容及操作步骤

丹皮酚对照品母液的配制：称取丹皮酚对照品10mg，用95％乙醇溶解，定容至10ml，摇匀。吸

取5ml于100ml量瓶内，用95%乙醇定容，作为母液备用，此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。

1.吸收曲线的测绘吸取母液1ml于10ml量瓶内，用95％乙醇定容。此时，丹皮酚含量为

0.0005%。将此溶液与空白溶液（95％乙醇）分别用两个相同的比色皿盛装后，放置在仪器的比

色架上，按仪器使用方法进行光谱扫描，得到吸收曲线图。

2．吸收系数的测定利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度，计算百分吸收系数。

实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量

一、实验目的

1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法

2.巩固紫外－可见分光光度计的操作方法

二、实验原理

黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐

等生成有色配合物。

铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚